蛋白質(zhì)純化與鑒定實(shí)驗(yàn)指南

序
前言
緒論
如何使用本指南
第1單元鈣調(diào)蛋白的純化
實(shí)驗(yàn)1活性測(cè)定：鈣調(diào)蛋白組分的活性測(cè)定
實(shí)驗(yàn)2組織提取物的制備
實(shí)驗(yàn)3粗分級(jí)分離
實(shí)驗(yàn)4離子交換層析
實(shí)驗(yàn)5疏水作用層析
實(shí)驗(yàn)6鈣調(diào)蛋白的鑒定：收率的計(jì)算
實(shí)驗(yàn)7鈣調(diào)蛋白的鑒定：電泳
實(shí)驗(yàn)8蛋白質(zhì)的裂解消化
實(shí)驗(yàn)9反相高效液相色譜
實(shí)驗(yàn)10鈣調(diào)蛋白的物理分析
實(shí)驗(yàn)11鈣調(diào)蛋白的化學(xué)分析
試劑的配制
第2單元Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子AP-1的純化
實(shí)驗(yàn)1Hela細(xì)胞核提取物的制備
實(shí)驗(yàn)2SephacryS-300HR凝膠過(guò)濾層析
實(shí)驗(yàn)3序列特異性DNA親和層析
實(shí)驗(yàn)4DNA酶I足跡分析
實(shí)驗(yàn)5凝膠遷移變動(dòng)分析
實(shí)驗(yàn)6肝素-SepharoseCL-2B的制備
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
第3單元大腸桿菌中過(guò)表達(dá)重組蛋白的純化
實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌細(xì)胞的破碎和包涵體的配制
實(shí)驗(yàn)2包涵體沉淀的溶解.重折疊和離子交換層析
實(shí)驗(yàn)3可溶性提取物的聚乙烯亞胺沉淀和免疫親和層析
實(shí)驗(yàn)4定量測(cè)定與制備小結(jié)
實(shí)驗(yàn)5蛋白質(zhì)的鑒定
方案補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)：從過(guò)表達(dá)細(xì)菌提純
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
第4單元鼠肝胰島素受體的溶解與純化
實(shí)驗(yàn)1大鼠肝臟質(zhì)膜的分離
實(shí)驗(yàn)2膜胰島素受體的溶解
實(shí)驗(yàn)3溶解受體的凝集素親和層析
實(shí)驗(yàn)4部分純化受體的胰島素親和層析
實(shí)驗(yàn)5胰島素受體與胰島素的交聯(lián)
實(shí)驗(yàn)6胰島素激素的胰島素受體自磷酸化
實(shí)驗(yàn)7胰島素受體糖基化的分析
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
附錄
附錄1pH的測(cè)量
附錄2緩沖液的配制
附錄3電導(dǎo)率的測(cè)量
附錄4固態(tài)硫酸銨法分級(jí)分離
附錄5蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳
附錄6蛋白質(zhì)的過(guò)甲酸氧化
附錄7用亞氨基二乙酸Sepharose6B分離磷酸肽
附錄8蛋白質(zhì)內(nèi)序分析用肽段的分離與純化
附錄9推薦讀物
技術(shù)索引
主題索引