生化實驗方法和技術(shù)

序
第一章 糖
實驗一 3，5-二硝基水楊酸比色定糖法
實驗二 細(xì)菌細(xì)胞壁糖的薄層層析
實驗三 葡糖-1-磷酸的制備及其純度測定
第二章 脂類
實驗四 紅細(xì)胞膜的制備及其結(jié)構(gòu)成分的分析
實驗五 脂質(zhì)體的制備
實驗六 包裹藥物脂質(zhì)體的制備
實驗七 靶向脂質(zhì)體的制備
實驗八 豬心肌線粒體、亞線粒體的制備及可溶性腺苷三磷酸酶的提純
實驗九 豬心線粒體腺苷三磷酸酶復(fù)合體在脂質(zhì)體上的重組
第三章 蛋白質(zhì)
實驗十 苯甲酰L-酪氨酰胺的合成
實驗十一 N-乙酰-L-酪氨酸乙酯的合成
實驗十二 雙甘二肽的合成
實驗十三 胱氨酸的制備
實驗十四 總氮量的測定——微量凱氏定氮法
實驗十五 蛋白質(zhì)及肽的N末端氨基酸FDNB分析法
實驗十六 蛋白質(zhì)及肽的N末端氨基酸DNS分析法——聚酰胺薄膜層析技術(shù)
實驗十七 羧肽酶法測定蛋白質(zhì)及肽的C末端氨基酸
實驗十八 蛋白質(zhì)及肽的序列分析——PTH分析法
實驗十九 DABITC/PITC雙偶合法測定蛋白質(zhì)序列
實驗二十 鄰苯二甲醛熒光分析法及其在肽檢測中的應(yīng)用
實驗二十一 血清蛋白質(zhì)的紙上電泳
實驗二十二 聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳分離蛋白質(zhì)
實驗二十三 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量（M1）
實驗二十四 聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量（M1）
實驗二十五 聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳法測定蛋白質(zhì)等電點
實驗二十六 蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量（M1）的測定——凝膠層析法
實驗二十七 細(xì)胞色素c的制備及測定
實驗二十八 雞卵類粘蛋白的制備
實驗二十九 牛腦鈣調(diào)素的分離純化及活性測定
[附]蛋白質(zhì)含量的測定法
[附1]雙縮脲法
[附2]Folin-酚試劑法（Lowry法）
[附3]考馬斯亮藍(lán)染色法（Bradford法）
[附4]紫外吸收法
第四章 酶
實驗三十 胰蛋白酶的動力學(xué)研究
實驗三十一 脲酶的動力學(xué)研究
[附]康維微量等溫蒸餾定氨法
實驗三十二 酰化酶I的制備及活力測定
[附]氨基酸含量的測定法
[附1]茚三酮溶液顯色法
[附2]甲醛滴定法
實驗三十三 豬胰蛋白酶的結(jié)晶及活力測定
實驗三十四 親和層析法純化胰蛋白酶
實驗三十五 乳酸脫氫酶同工酶的制備及活力測及活力測定
實驗三十六 辣根過氧化物酶的制備及活力測定
實驗三十七 大腸桿菌堿性磷酸酯酶的制備
實驗三十八 羧肽酶Y的分離提純
實驗三十九 親和層析法分離牛脾二肽酶
實驗四十 親和層析法純化胃蛋白酶
實驗四十一 限制性內(nèi)切酶EcoRI的純化及活力測定
實驗四十二 銅鋅超氧化物歧化酶的分離、純化及其純度鑒定
實驗四十三 利用苯甲脒一瓊脂糖凝膠親和層析法純化尿激酶
第五章 核酸
實驗四十四 動物肝臟RNA的制備（苯酚法）和純度測定
[附1]紫外吸收法測定核酸含量
[附2]二苯胺顯色法測定DNA含量
[附3]地衣酚顯色法測定RNA含量
[附4]定磷法測定核酸含量
實驗四十五 酵母和白地霉RNA的制備（稀堿法和濃鹽法）
實驗四十六 酵母轉(zhuǎn)移RNA的制備（苯酚法）
實驗四十七 用硫氰酸胍一酚一氯仿分離提取RNA及mRNA的純化
實驗四十八 小牛胸腺DNA的制備（濃鹽法）
實驗四十九 細(xì)胞核的分離
實驗五十 大鼠肝細(xì)胞染色質(zhì)的分離
實驗五十一 RNA的聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗五十二 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗五十三 脈沖電場凝膠電泳分離大分子DNA
實驗五十四 離子交換柱層析法分離核苷酸
實驗五十五 高壓紙上電泳法分析鑒定核苷酸
實驗五十六 DNA重復(fù)序列與單一序列的分離——DNA的羥基磷灰石柱層析與DNA復(fù)性動力學(xué)方法
實驗五十七 肌二磷和胞二磷的化學(xué)合成
第六章 基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)
實驗五十八 質(zhì)粒的分離、純化和鑒定
[附1]質(zhì)粒DNA的小量制備
一、堿裂解法
二、煮沸法
三、小量一步提取法
[附2]質(zhì)粒DNA的大量提取
一、堿裂解法
二、SDS裂解法
三、煮沸法
[附3]質(zhì)粒DNA的純化
一、氯化銫一溴乙錠梯度平衡超速離心法
二、柱層析法
實驗五十九 DNA探針的同位素標(biāo)記法
一、雙鏈DNA探針的標(biāo)記
（一）切口移位法
[附]DE81濾紙吸附法測定
放射性標(biāo)記的參入比
（二）隨機引物延伸法
二、DNA末端標(biāo)記法
（一）T4噬菌體多核苷酸激酶標(biāo)記DNA5端
（二）T4DNA聚合酶標(biāo)記雙鏈DNA3末端
實驗六十 用光敏生物素標(biāo)記核酸探針檢測基因
實驗六十一 M13噬菌體載體DNA的重組和克隆
實驗六十二 核酸分子雜交及Southern印跡術(shù)
實驗六十三 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)
實驗六十四 cDNA的合成及克隆——逆轉(zhuǎn)錄與PCR偶聯(lián)法
實驗六十五 λgtll噬菌體表達(dá)文庫的篩選
一、寡聚核苷酸探針篩選法
二、免疫學(xué)篩選法
實驗六十六 DNA序列分析——化學(xué)法
實驗六十七 DNA序列分析——酶法
一、單鏈DNA模板法
二、雙鏈DNA模板法
實驗六十八 寡聚核苷酸引物誘導(dǎo)的定點突變
第七章 免疫化學(xué)
實驗六十九 動物的常規(guī)免疫和抗血清IgG類的純化
實驗七十 雙向免疫擴(kuò)散法及免疫電泳
一、雙向免疫擴(kuò)散測定法
二、微量免疫電泳法
三、對流免疫電泳
四、單向定量免疫電泳（火箭電泳）
五、雙向定量免疫電泳
實驗七十一 酶聯(lián)免疫吸附測定法
實驗七十二 免疫吸附親和層析法分離純化甲胎蛋白
實驗七十三 用免疫熒光法觀察甲胎蛋白在人胚肝中的分布
實驗七十四 單克隆抗體技術(shù)
一、融合用細(xì)胞的制備
二、細(xì)胞融合
三、雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)
四、特異性抗體的檢測
五、雜交瘤細(xì)胞的克隆化
六、雜交瘤細(xì)胞的凍存
七、雜交瘤細(xì)胞株染色體檢測
八、單克隆抗體的大量制備
九、單克隆抗體的純化
十、單克隆抗體的保存
十一、單克隆抗體Ig類型的鑒定
實驗七十五 固相免疫法檢測抗原純度和相對分子質(zhì)量及Western印跡術(shù)
第八章 組織代謝
實驗七十六 瓦氏呼吸計測壓法及組織呼吸強度的測定
一、瓦氏呼吸計測壓法
二、組織耗氧量的測定
實驗七十七 D-系α-氨基酸的氧化脫氨基作用
[附]等溫蒸餾定氨法
實驗七十八 用液氮固定法研究動物的新陳代謝——自然缺氧條件下
機體乳酸含量變化的測定
實驗七十九 用濾紙定量層析法研究大
白鼠在自然缺氧狀態(tài)下
腦組織中游離氨基酸
含量的變化
第九章 放射性同位素
實驗八十 放射性焦磷酸鹽（PPi）的制備
實驗八十一 酶促合成高比放射性7磷一腺苷三磷酸
實驗八十二 放射性焦磷酸（3zPPi）一腺苷三磷酸交換法測定核糖核酸連接酶活性
附錄
一、實驗室安全及防護(hù)知識
二、實驗室常識
三、玻璃儀器的洗滌及各種洗液的配制法
四、緩沖溶液
五、生物化學(xué)中某些重要化合物的Mr及pK值
六、某些重要生化物質(zhì)的摩爾消光系數(shù)
七、氨基酸的一些物理常數(shù)一
八、某些蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)
九、核苷、核苷酸及其衍生物的一些物理常數(shù)
十、某些生物大分子、亞細(xì)胞器及微生物的沉降系數(shù)
十一、指示劑
十二、冷卻劑和干燥劑
十三、硫酸銨飽和度的常用表
十四、測壓法常用物理常數(shù)表
十五、同位素資料
十六、離心機轉(zhuǎn)數(shù)（r／min）與相對離心力（RCF）的換算
十七、試劑的配制及一些常用數(shù)據(jù)表
十八、層析法常用數(shù)據(jù)表及性質(zhì)
（一）離子交換纖維素
（二）常用離子交換樹脂某些物理化學(xué)性質(zhì)表
（三）各類常用離子交換樹脂型號對照表
（四）聚丙烯酰胺凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù)
（五）瓊脂糖凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù)
（六）各種凝膠所允許的最大操作壓
（七）如何選擇層析介質(zhì)
（八）凝膠過濾層析介質(zhì)分離范圍總覽
（九）凝膠過濾層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)
（十）離子交換介質(zhì)在純化步驟中的選擇
（十一）離子交換層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)
（十二）疏水層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)
（十三）親和層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)w
（十四）反相層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)
（十五）在位清洗和在位消毒
十九、分子生物學(xué)及基因工程常用數(shù)據(jù)
（一）有關(guān)核酸的常用數(shù)據(jù)
（二）常見限制性內(nèi)切酶酶切位點
（三）酶類
（四）緩沖液
（五）貯存液
（六）與DNA凝膠電泳有關(guān)的數(shù)據(jù)
（七）細(xì)菌培養(yǎng)基和抗生素
（八）雜交試驗中用于降低背景的封閉劑
（九）溴化乙錠溶液的凈化處理
二十、一些常用單位
二十一、一些重要的生物化學(xué)期刊及手冊