重組蛋白分離與分析

第1章 重組蛋白分離與分析概論1 11 重組蛋白質(zhì)概論1 12 重組蛋白質(zhì)的設(shè)計(jì)及純化技巧2 13 純化目標(biāo)5 131 產(chǎn)品的純度和安全性5 132 終產(chǎn)物成本5 14 純化策略6 15 純化過程的放大7 16 對純化的綜合評價(jià)8 17 合理設(shè)計(jì)純化工藝8 主要參考文獻(xiàn)11 第2章 重組蛋白純化的一般工藝及方法14 21 引言14 22 用做純化的主要蛋白質(zhì)性質(zhì)14 221 蛋白質(zhì)大小15 222 蛋白質(zhì)形狀15 223 蛋白質(zhì)荷電性15 224 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)16 225 蛋白質(zhì)疏水性16 226 蛋白質(zhì)溶解度16 227 蛋白質(zhì)密度16 228 蛋白質(zhì)與配體結(jié)合能力16 229 蛋白質(zhì)與金屬螯合能力16 2210 蛋白質(zhì)的某些特殊性質(zhì)17 23 純化分離技術(shù)18 231 發(fā)酵液的預(yù)處理18 232 細(xì)胞分離技術(shù)20 233 細(xì)胞破碎技術(shù)24 234 生物物質(zhì)的分離純化技術(shù)24 24 純化方案中純化順序的選擇76 25 固定相的選擇77 26 方案的有效性分析78 主要參考文獻(xiàn)79 第3章 細(xì)胞破碎的物理及化學(xué)方法81 31 前言81 32 破碎率的評價(jià)81 33 破碎方法82 331 球磨勻漿法83 332 轉(zhuǎn)子-定子式勻漿機(jī)勻漿87 333 高壓勻漿機(jī)勻漿90 334 超聲波破碎94 335 其他物理方法95 336 細(xì)胞自溶98 337 酶解法101 338 干燥法102 339 其他化學(xué)溶劑法103 3310 細(xì)胞滲透法103 3311 通過細(xì)胞自身調(diào)控體系進(jìn)行細(xì)胞的破碎104 34 總結(jié)104 主要參考文獻(xiàn)106 第4章 純化過程中如何防止蛋白水解108 41 天然及變性蛋白的水解108 411 蛋白酶的生化作用108 412 蛋白酶的種類和蛋白酶的作用機(jī)理109 413 蛋白酶的特異性及對降解底物的敏感性110 42 用作宿主細(xì)胞的真核、原核生物體內(nèi)的蛋白酶111 421 大腸桿菌 (Ecoli）內(nèi)的蛋白酶111 422 枯草桿菌 (Bacillus subtilis）產(chǎn)生的蛋白酶112 423 酵母中的蛋白酶113 424 哺乳動物細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶115 43 蛋白酶的鑒定116 44 防止重組蛋白水解的策略117 441 基因調(diào)控法118 442 去除蛋白酶的策略121 443 抑制蛋白酶的策略122 主要參考文獻(xiàn)125 第5章 從重組蛋白質(zhì)中除去N末端甲硫氨酸的方法127 51 引言127 511 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯后的修飾及鑒定分析127 512 甲硫氨酸氨基肽酶的特性131 513 胞質(zhì)間重組蛋白的加工131 514 與多余甲硫氨酸相關(guān)的非均勻性和免疫原性132 52 去除末端甲硫氨酸的方法133 521 體內(nèi)去除末端甲硫氨酸的方法133 522 去除末端甲硫氨酸的體外方法135 主要參考文獻(xiàn)137 第6章 藥用蛋白質(zhì)的純化141 61 引言141 62 蛋白質(zhì)純化過程中的質(zhì)量控制142 621 蛋白質(zhì)生物功效142 622 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)143 623 蛋白質(zhì)純度的測定143 624 終產(chǎn)品中痕量雜質(zhì)的分析143 63 蛋白質(zhì)純化準(zhǔn)則143 631 初始原料物質(zhì)的濃度和雜質(zhì)性質(zhì)144 632 非蛋白雜質(zhì)的去除145 633 DNA的去除145 634 熱源的去除147 635 病毒的去除149 636 外源蛋白的去除150 64 方案的有效性151 65 結(jié)論152 主要參考文獻(xiàn)153 第7章 利用工程修飾改進(jìn)重組蛋白的純化分離157 71 引言157 72 引入切割位點(diǎn)的重組工程蛋白158 73 促進(jìn)活性蛋白分離的工程技術(shù)159 731 形成包涵體以穩(wěn)定蛋白質(zhì)160 732 基團(tuán)修飾以利天然活性蛋白質(zhì)生產(chǎn)162 74 簡化純化工藝的蛋白質(zhì)工程163 741 改進(jìn)色譜性能的蛋白質(zhì)工程164 742 構(gòu)建工程位點(diǎn)使蛋白質(zhì)具有免疫親和性能164 743 構(gòu)建工程位點(diǎn)使蛋白質(zhì)具有離子交換吸附性能166 744 構(gòu)建工程位點(diǎn)使蛋白質(zhì)具有金屬親和吸附性能168 745 低成本純化蛋白工程171 746 改進(jìn)分析方法的蛋白質(zhì)工程171 75 結(jié)論172 主要參考文獻(xiàn)173 第8章 大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白的分離純化175 81 引言175 82 大腸桿菌表達(dá)的分泌型重組蛋白的純化分離178 821 純化方法179 822 實(shí)例180 823 分泌型重組蛋白的純化分離總結(jié)199 83 大腸桿菌表達(dá)的包涵體蛋白的純化分離200 831 確定包涵體量201 832 重組蛋白穩(wěn)定性檢測204 833 純化方案206 834 包涵體的組成分析210 835 包涵體的結(jié)構(gòu)214 836 影響包涵體形成的因素214 837 包涵體蛋白純化實(shí)例216 838 包涵體蛋白純化總結(jié)221 主要參考文獻(xiàn)221 第9章 酵母表達(dá)的重組蛋白的分離純化225 91 引論225 92 釀酒酵母或面包酵母表達(dá)的重組蛋白的分離純化227 921 釀酒酵母或面包酵母表達(dá)的胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分離純化228 922 釀酒酵母或面包酵母分泌表達(dá)的蛋白質(zhì)的分離純化232 923 結(jié)論234 924 釀酒酵母或面包酵母表達(dá)的重組蛋白的研究展望235 93 Pichia pastoris生產(chǎn)的重組蛋白的分離純化235 931 背景235 932 Pichia pastoris表達(dá)體系的發(fā)展236 933 Ppastoris表達(dá)的胞內(nèi)外源蛋白239 934 Pichia pastoris分泌的外源蛋白的分離純化242 935 討論248 主要參考文獻(xiàn)249 第10章 單克隆抗體的純化252 101 引言252 102 單克隆抗體制備過程253 103 抗體的物理特征257 104 單克隆抗體純化工藝258 1041 澄清258 1042 沉淀260 1043 分離260 1044 非蛋白雜質(zhì)的去除271 附錄 鼠源性病毒檢測273 主要參考文獻(xiàn)274