生化分離技術

第一章 緒論
一、生化分離技術發(fā)展的歷史和地位
二、生化分離技術的應用范圍
三、生化分離技術的主要種類
四、研究對象、特點及基本原理
五、生化分離技術的基本步驟
六、生化分離技術方案設計與選擇
七、生化分離技術的發(fā)展趨勢
參考文獻

第二章 生物樣品的預處理
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 樣品分離的預提取過程
一、植物組織提取物的制備
二、動物組織提取物的制備
三、細菌中重組蛋白的提取制備
第三節(jié) 細胞的破碎與分離
一、概述
二、常用的幾種破碎方法
三、細胞破碎技術研究的發(fā)展方向
參考文獻

第三章 沉淀技術
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 沉淀方法分類
一、鹽析法
二、有機溶劑沉淀法
三、等電點沉淀法
四、非離子多聚物沉淀法
五、選擇性變性沉淀
六、生成鹽類復合物的沉淀
七、親和沉淀
八、sIs聚合物與親和沉淀
第三節(jié) 沉淀技術應用
一、蛋白質
二、核酸
三、多糖
參考文獻

第四章 膜分離技術
第一節(jié) 概述
一、膜分離技術發(fā)展的歷史
二、膜分離技術在分離工程中的重要作用及
存在的問題
第二節(jié) 分類和定義
一、膜的定義
二、膜的分類
第三節(jié) 技術原理
一、壓力特征
二、濃差極化

三、膜分離理論
四、膜的截留能力
五、膜的污染
六、納濾膜技術
第四節(jié) 膜分離主要參數(shù)
一、國內(nèi)外主要膜和組件產(chǎn)品簡介
二、膜組件的選擇
三、膜的選擇及使用
第五節(jié) 操作技術
一、超濾和微濾過程的預處理
二、膜的操作
三、污染膜的清洗和膜性能的再生
第六節(jié) 膜分離技術的應用
一、微濾的應用
二、超濾的應用
三、納濾的應用
參考文獻

第五章 凝膠過濾層析
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 原理
一、凝膠過濾的概念
二、生物分子的相對分子質量、分子大小和形狀
三、凝膠過濾的有關理論問題
第三節(jié) 凝膠過濾介質
一、凝膠過濾介質的基本結構
二、凝膠過濾介質的參數(shù)及性質
三、凝膠過濾介質的主要類型
第四節(jié) 實驗方案設計
一、凝膠過濾介質的選擇
二、洗脫劑的選擇
三、層析柱的選擇
四、選擇預裝柱
第五節(jié) 層析技術
一、凝膠的準備
二、裝柱
三、樣品和洗脫劑的準備
四、加樣
五、洗脫技術
六、樣品的檢測、收集和處理
七、凝膠過濾介質的再生、清洗和儲存
第六節(jié) 應用實例
一、脫鹽
二、緩沖液交換
三、相對分子質量的測定
四、測定多聚物的分子量分布
五、混合物的分級分離
六、蛋白質的復性
參考文獻


第六章 離子交換層析
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 相關理論
一、基本原理
二、離子交換理論
三、離子交換的分辨率
第三節(jié) 離子交換劑
一、基本結構
二、功能基團和酸堿性質
三、離子交換劑的部分性質
四、離子交換劑的類型
第四節(jié) 方案設計和層析技術
一、離子交換劑的選擇
二、緩沖液的選擇和層析條件的確定
三、層析柱的尺寸
四、離子交換劑的準備
五、樣品的準備
六、加樣
七、洗脫技術
八、樣品的收集和處理
九、離子交換劑的再生、清洗、消毒和儲存
十、大量樣品的離子交換
十一、分批分離
第五節(jié) 技術的應用
一、酶、蛋白質及肽類
二、糖類化合物
參考文獻

第七章 親和層析
第一節(jié) 概述
一、基本原理
二、親和層析的分離過程
第二節(jié) 親和層析配體
一、親和配體的要求和性質
二、親和配體的類型
第三節(jié) 親和吸附劑
一、配體的選擇
二、載體的選擇
三、連接臂的選擇
四、親和吸附劑的制備方法
五、裸露活化基團的封閉和親和吸附劑的儲存
六、配體濃度的估計
第四節(jié) 實驗技術
一、親和層析操作過程
二、親和層析的操作注意事項
第五節(jié) 親和層析的特殊類型
一、凝集素親和層析
二、免疫親和層析
三、金屬鰲合親和層析
四、染料配體親和層析

五、共價層析
第六節(jié) 應用
一、抗體和抗原的純化
二、酶的純化
三、糖蛋白和脂蛋白的純化
四、其他蛋白質的純化
五、細胞的純化
參考文獻

第八章 層析聚焦
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 原理簡介
一、蛋白質的等電點
二、pH梯度的形成
三、聚焦效應
第三節(jié) 多組分緩沖劑與多緩沖離子
交換劑
一、多組分緩沖劑
二、多緩沖離子交換劑
三、其他緩沖液
第四節(jié) 實驗要點
一、PBE、PB和起始緩沖液的選擇
二、凝膠柱的裝填
三、樣品的準備
四、上樣和洗脫
五、從分離的蛋白質中除去多組分緩沖劑的方法
六、多組分緩沖離子交換劑的再生
七、層析聚焦實驗中需注意的問題
八、結果討論
第五節(jié) 技術的應用
一、分離模型蛋白質
二、層析聚焦法分離純化HIV一1反轉錄酶
三、層析聚焦法分離谷胱甘肽轉硫酶
四、層析聚焦法分離人血清載脂蛋白
(apocⅢ)及其亞型
五、鑒定某些酶的性質
參考文獻

第九章 反相層析
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 原理
一、反相層析的概念
二、溶質分子的疏水性質
三、反相層析的保留機理
四、反相分離過程中的參數(shù)
第三節(jié) 反相層析介質
一、反相層析介質的基本結構
二、反相層析介質的參數(shù)和性質
三、幾種常見的反相介質
第四節(jié) 反相層析的流動相

一、有機溶劑
二、流動相的pH控制
三、離子對試劑
第五節(jié) 方案設計和層析技術
一、反相介質的選擇和層析柱的準備
二、流動相的選擇和準備
三、樣品的準備和加樣操作
四、洗脫模式的選擇和條件控制
五、樣品的檢測和收集
六、層析柱的再生、清洗和儲存
第六節(jié) 應用實例
一、用反相層析對樣品脫鹽
二、分析型高分辨率分離
三、制備型分離純化
參考文獻

第十章 疏水作用層析
第一節(jié) 引言
第二節(jié) 原理
一、疏水作用層析的概念
二、疏水作用層析與反相層析的區(qū)別
三、影響疏水作用層析過程的參數(shù)
第三節(jié) 疏水作用層析介質
一、疏水作用層析介質的基本結構
二、常見疏水作用層析介質的種類
第四節(jié) 實驗方案設計和層析技術
一、介質的選擇和層析柱的準備
二、樣品的準備
三、層析條件的確定和優(yōu)化
四、層析介質的再生、清洗和儲存
第五節(jié) 應用實例
參考文獻

第十一章 電泳技術
第一節(jié) 概述
一、基本原理
二、凝膠介質
三、檢測方法
四、電泳儀器
第二節(jié) 天然聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、基本原理
二、天然PAGE的類型
三、影響分離效果的因素
四、蛋白質分子量的測定
五、天然PAGE的實驗方法
六、天然PAGE的應用范圍
第三節(jié) SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、SDS-PAGE的分離原理
二、SDS-PAGE的類型
三、影響分離效果的因素

四、蛋白質亞基分子量的測定
五、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的實驗方法
六、SDS-PAGE的應用范圍
第四節(jié) 等電聚焦
一、原理
二、載體兩性電解質和pH梯度的形成
三、載體兩性電解質等電聚焦方法
四、固相pH梯度介質及其pH梯度的形成
五、固相pH梯度等電聚焦方法
六、等電聚焦系統(tǒng)的選擇
七、等電聚焦的應用范圍
第五節(jié) 雙向電泳
一、樣品制備
二、等電聚焦
三、緩沖液置換
四、梯度SDS-PAGE
五、檢測
六、蛋白質圖譜分析
七、應用
第六節(jié) 免疫電泳
一、原理
二、免疫電泳類型
三、免疫電泳技術
四、電泳方法
五、應用
第七節(jié) 蛋白質印跡
一、原理
二、實驗材料的選擇
三、蛋白質印跡實驗方法
四、應用
第八節(jié) 毛細管電泳
一、原理
二、毛細管電泳的主要類型
三、毛細管電泳儀
四、影響毛細管電泳分離的主要因素
五、毛細管電泳過程
六、毛細管電泳的應用
參考文獻

第十二章 離心分離技術
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 離心設備及其用途
一、離心機
二、轉子
三、離心管
四、離心機附件
第三節(jié) 基本原理和計算
一、離心加速度、離心力和相對離心力
二、沉降速度
三、沉降系數(shù)

四、離心時間和K因子
五、分子質量的計算
第四節(jié) 超離心技術
一、制備超離心
二、分析超離心簡介
第五節(jié) 應用實例
一、差速離心法從細菌中分離糖原
二、非連續(xù)密度梯度區(qū)帶離心法分離
甲型肝炎病毒(HAV)
三、連續(xù)密度梯度區(qū)帶離心法的應用
參考文獻

第十三章 其他分離技術
第一節(jié) 泡沫分離法
一、泡沫分離法的分類
二、泡沫分離技術的基本原理
三、泡沫分離的操作方式及其影響因素
四、泡沫分離的應用
第二節(jié) 液膜分離法
一、液膜及其分類
二、液膜分離的機理
三、液膜材料的選擇與液膜分離的操作過程
四、液膜分離技術的應用
第三節(jié) 膜層析技術的原理與應用
一、概述
二、膜層析的原理和特點
三、膜層析介質材料及其組件
四、膜層析的制備
五、膜層析的應用
六、展望
參考文獻

生化分離實驗部分
實驗1 凝膠層析法測定蛋白質相對分子質量
實驗2 酵母蔗糖酶的提取與純化
實驗3 等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
實驗4 蛋白質的雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗5 親和層析純化胰蛋白酶
參考文獻