細胞工程

第一篇 細胞培養(yǎng)基本技術
　第一章 細胞培養(yǎng)的基本知識
　　第一節(jié) 基本概念和名詞
　　第二節(jié) 細胞的特性
　　　一、培養(yǎng)細胞的形態(tài)與結構
　　　二、培養(yǎng)細胞的生長方式和類型
　　　三、培養(yǎng)細胞的生長特點和生長增殖過程
　第二章 細胞培養(yǎng)的條件
　　第一節(jié) 細胞的營養(yǎng)
　　　一、水
　　　二、糖
　　　三、氨基酸
　　　四、維生素
　　　五、無機離子和微量元素
　　　六、血清
　　　七、促細胞生長因子
　　第二節(jié) 影響細胞生長的因素
　　　一、溫度
　　　二、滲透壓
　　　三、氣體環(huán)境和pH值
　　　四、無毒和無菌
　　　五、輻射線和超聲波
　　　六、細胞接種密度
　　　七、容器轉動速度和懸浮攪動速度
　第三章 細胞培養(yǎng)的必備設施、常用器材和培養(yǎng)基
　　第一節(jié) 細胞培養(yǎng)的必備設施
　　　一、無菌實驗室
　　　二、超凈工作臺
　　　三、恒溫培養(yǎng)箱
　　　四、其他設備
　　第二節(jié) 細胞培養(yǎng)常用器材及處理方法
　　　一、玻璃器材
　　　二、塑料器材
　　　三、橡膠器材
　　　四、金屬器材
　　　五、其他用品
　　第三節(jié) 常用溶液、培養(yǎng)基及其配制
　　　一、平衡鹽溶液
　　　二、其他溶液
　　　三、培養(yǎng)基
　第四章 原代細胞的培養(yǎng)與建系
　　第一節(jié) 原代細胞的取材
　　　一、取材的基本要求
　　　二、各類組織的取材技術
　　第二節(jié) 原代細胞的分離和制作
　　　一、懸浮細胞的分離方法
　　　二、實體組織材料的分離方法
　　　三、原代細胞的培養(yǎng)方法
　　第三節(jié) 原代和傳代細胞的培養(yǎng)和維持
　　　一、原代細胞的培養(yǎng)與維持
　　　二、原代細胞培養(yǎng)的首次傳代
　　　三、傳代細胞的傳代培養(yǎng)
　　　四、傳代細胞的建系和維持
　　第四節(jié) 原代細胞的純化和克隆
　　　一、細胞的純化
　　　二、細胞的克隆
　第五章 正常細胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 上皮細胞的培養(yǎng)
　　　一、表皮細胞分離培養(yǎng)
　　　二、乳腺上皮細胞分離培養(yǎng)
　　　三、子宮頸上皮細胞分離培養(yǎng)
　　　四、肝細胞分離培養(yǎng)
　　　五、胰腺細胞分離培養(yǎng)
　　　六、氣管及支氣管上皮細胞分離培養(yǎng)
　　　七、前列腺細胞培養(yǎng)
　　　八、口腔黏膜上皮細胞培養(yǎng)
　　　九、胃上皮細胞培養(yǎng)
　　第二節(jié) 中胚層細胞培養(yǎng)
　　　一、結締組織細胞培養(yǎng)
　　　二、肌肉組織細胞培養(yǎng)
　　　三、各種骨細胞分離培養(yǎng)
　　　四、骨髓細胞分離培養(yǎng)
　　　五、內(nèi)皮細胞分離培養(yǎng)
　　　六、血細胞分離培養(yǎng)
　　第三節(jié) 神經(jīng)外胚層細胞培養(yǎng)
　　　一、神經(jīng)細胞分離培養(yǎng)
　　　二、神經(jīng)膠質細胞分離培養(yǎng)
　　第四節(jié) 眼細胞培養(yǎng)
　　　一、概述
　　　二、眼細胞培養(yǎng)類型及方法
　第六章 干細胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 干細胞的概念和來源
　　　一、干細胞的概念
　　　二、干細胞的來源
　　第二節(jié) 胚胎干細胞培養(yǎng)
　　　一、胚胎干細胞的特性和分化潛能
　　　二、胚胎干細胞的建系
　　　三、胚胎干細胞的培養(yǎng)
　　第三節(jié) 造血干/祖細胞培養(yǎng)
　　　一、造血干/祖細胞的生物學特性及研究方法
　　　二、造血祖細胞培養(yǎng)技術
　　　三、造血干/祖細胞的分離純化
　　　四、造血干/祖細胞的體外擴增
　　　五、造血干/祖細胞體外擴增的臨床應用
　　第四節(jié) 神經(jīng)干細胞的分離和培養(yǎng)
　　　一、神經(jīng)干細胞生物學特性
　　　二、影響神經(jīng)干細胞分化的因素
　　　三、神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)技術
　　　四、神經(jīng)干細胞培養(yǎng)的意義及應用
　第七章 昆蟲、魚及其他動物細胞的培養(yǎng)
　　第一節(jié) 昆蟲細胞的培養(yǎng)
　　　一、鱗翅目昆蟲細胞原代培養(yǎng)的基本方法
　　　二、鱗翅目昆蟲細胞系的建立
　　　三、昆蟲缺陷型細胞株的建立
　　第二節(jié) 魚類細胞培養(yǎng)
　　　一、魚類組織細胞培養(yǎng)
　　　二、魚類血細胞培養(yǎng)方法
　　第三節(jié) 中華鱉胚胎細胞培養(yǎng)
　　　一、中華鱉胚胎細胞的原代培養(yǎng)
　　　二、中華鱉胚胎細胞的傳代培養(yǎng)
　　　三、中華鱉胚胎細胞培養(yǎng)應注意的問題
　第八章 腫瘤細胞的誘導分化和培養(yǎng)
　　第一節(jié) 腫瘤細胞的培養(yǎng)
　　　一、腫瘤細胞的生物學特性
　　　二、腫瘤細胞的生物學特性的檢測
　　　三、腫瘤細胞的取材和培養(yǎng)
　　第二節(jié) 腫瘤細胞的誘導分化
　　　一、白血病細胞的誘導分化
　　　二、實體瘤細胞的誘導分化
　　　三、腫瘤細胞體內(nèi)分化誘導實例
　第九章 細胞培養(yǎng)的污染及控制
　　第一節(jié) 污染的類型
　　　一、細菌污染
　　　二、真菌污染
　　　三、支原體污染
　　　四、病毒污染
　　　五、其他污染
　　第二節(jié) 污染來源及鑒別
　　　一、污染來源
　　　二、污染的鑒別
　　第三節(jié) 污染的清除和預防
　　　一、污染的清除
　　　二、污染的預防
　第十章 細胞的冷凍保存復蘇技術
　　第一節(jié) 細胞的凍存
　　　一、概述
　　　二、主要冷凍設備和材料
　　　三、細胞凍存方法
　　第二節(jié) 細胞的復蘇
　　　一、細胞復蘇的原則
　　　二、細胞復蘇的主要操作步驟
　　　三、復蘇時的注意事項
　　第三節(jié) 細胞的運輸
　　　一、冷凍儲存運輸
　　　二、充液法
　第十一章 培養(yǎng)細胞觀察與檢測方法
　　第一節(jié) 培養(yǎng)細胞的常規(guī)檢查和觀察方法
　　　一、肉眼觀察
　　　二、顯微鏡觀察
　　　三、細胞的生長狀態(tài)的觀察
　　　四、微生物污染的觀察
　　第二節(jié) 培養(yǎng)活細胞的觀察方法
　　　一、相差顯微鏡直接觀察法
　　　二、暗視野顯微鏡觀察活細胞
　　　三、縮時顯微攝影觀察
　　　四、離體活細胞染色觀察
　　第三節(jié) 細胞固定觀察法
　　　一、細胞固定基本方法
　　　二、常用染色方法
　　　三、特殊染色方法
　　第四節(jié) 細胞生長狀況有關指標的檢測方法
　　　一、細胞計數(shù)
　　　二、細胞生長曲線和生長倍數(shù)
　　　三、細胞分裂指數(shù)
　　　四、細胞接種存活率
　　　五、克隆形成率
　　第五節(jié) 細胞生物活性的化學檢測法
　　　一、四唑鹽（MTT）比色法
　　　二、細胞蛋白質含量測定法（考馬斯亮藍測定法）
　　　三、細胞蛋白質合成測定法（H亮氨酸摻入法）
　　　四、細胞DNA合成測定法
　　第六節(jié) 電子顯微鏡觀察法
　　　一、透射電子顯微鏡細胞樣品制備技術和觀察方法
　　　二、掃描電子顯微鏡細胞樣品制備
　　第七節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察法
　　　一、激光掃描共聚焦顯微鏡基本結構
　　　二、激光掃描共聚焦顯微鏡使用步驟
　　　三、激光掃描共聚焦顯微鏡功能
第二篇 細胞工程常用專門技術
　第十二章 細胞染色體檢測和熒光原位雜交技術
　　第一節(jié) 性染色質檢測
　　　一、X染色質顯示法
　　　二、Y染色質顯示法
　　第二節(jié) 培養(yǎng)細胞染色體顯示方法
　　　一、原理
　　　二、傳代細胞染色體檢測
　　　三、微量外周血白細胞染色體檢查
　　　四、羊水細胞培養(yǎng)
　　第三節(jié) 染色體結構顯示和檢測
　　　一、染色體顯帶原理和種類
　　　二、染色體顯帶方法要點
　　　三、常用染色體顯帶法
　　　四、姐妹染色單體分化染色
　　第四節(jié) 熒光原位雜交技術
　　　一、探針的類型和制備
　　　二、熒光素標記原位雜交的方法
　　　三、熒光原位雜交的基本步驟
　　　四、染色體熒光原位雜交基本步驟
　　　五、影響熒光原位雜交實驗結果的因素
　　　六、熒光原位雜交技術的優(yōu)點和存在的主要問題
　第十三章 體外培養(yǎng)細胞的轉化和轉化灶的分離培養(yǎng)
　　第一節(jié) 細胞轉化的概念、方式和過程
　　　一、細胞轉化與惡變的區(qū)別
　　　二、細胞轉化的方式
　　　三、細胞轉化的基本過程
　　第二節(jié) 轉化細胞的誘變因素及選擇
　　　一、誘變劑的選擇
　　　二、轉化細胞的選擇和常用的細胞種類
　　第三節(jié) 細胞轉化方法和轉化灶的分離純化
　　　一、細胞轉化方法
　　　二、轉化灶的分離
　　　三、轉化細胞的篩選
　　第四節(jié) 幾種常用細胞轉化技術實例
　　　一、化學致癌物轉化細胞
　　　二、病毒轉化細胞
　第十四章 DNA損傷和細胞凋亡檢測技術
　　第一節(jié) DNA損傷檢測技術
　　　一、DNA片段分析——DNA梯形條帶分析
　　　二、DNA斷裂檢測
　　第二節(jié) 細胞凋亡及其檢測技術
　　　一、細胞凋亡的特征
　　　二、細胞凋亡的分子機制
　　　三、細胞凋亡的醫(yī)學意義
　　　四、細胞凋亡試驗常用的方法
　　　五、bcl凋亡基因表達的檢測
　　　六、JAM檢測技術
　第十五章 細胞融合、單克隆抗體的雜交瘤技術和生產(chǎn)技術
　　第一節(jié) 細胞融合
　　　一、常用細胞融合劑
　　　二、細胞融合方式
　　第二節(jié) 單克隆抗體的雜交瘤技術
　　　一、單克隆抗體技術基本原理
　　　二、單克隆抗體技術的特點
　　　三、單克隆抗體技術的應用
　　　四、雜交瘤細胞制備的操作程序
　　第三節(jié) 單克隆抗體生產(chǎn)技術
　　　一、牛淋巴液體外循環(huán)培養(yǎng)法
　　　二、微囊培養(yǎng)法（microencapsu lation）
　　　三、含血清的雜交瘤細胞大量培養(yǎng)法
　　　四、無血清的雜交瘤細胞培養(yǎng)法
　　　五、工業(yè)化懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)單克隆抗體的工藝流程
　第十六章 細胞毒試驗技術和藥物敏感試驗的細胞培養(yǎng)法
　　第一節(jié) 癌細胞的殺傷研究
　　　一、癌細胞殺傷研究的種類
　　　二、細胞毒試驗
　　第二節(jié) 藥物敏感試驗的細胞培養(yǎng)法
　　　一、細胞培養(yǎng)在藥物敏感試驗中的作用
　　　二、藥物敏感試驗方法
　　　三、不同抗癌藥物的生物效應指標的選擇
　第十七章 病毒研究中應用的細胞培養(yǎng)技術和疫苗生產(chǎn)技術
　　第一節(jié) 細胞培養(yǎng)用于病毒研究的優(yōu)點
　　第二節(jié) 用細胞培養(yǎng)技術分離病毒
　　　一、接種標本的處理
　　　二、病毒的細胞培養(yǎng)
　　　三、在細胞培養(yǎng)中病毒作用之識別
　　　四、在單層細胞上滴定病毒
　　第三節(jié) 病毒的鑒定技術
　　　一、病毒蝕斑技術
　　　二、病毒蝕斑抑制試驗
　　　三、細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的中和試驗
　　　四、用細胞培養(yǎng)法制備病毒血清學抗原應注意的問題
　　第四節(jié) 病毒和疫苗的生產(chǎn)制備技術
　　　一、病毒的生產(chǎn)制備
　　　二、病毒疫苗的生產(chǎn)制備
　第十八章 細胞因子
　　第一節(jié) 細胞因子概況
　　　一、細胞因子研究概況
　　　二、細胞因子的特點
　　　三、各類細胞因子特性和功能
　　　四、細胞因子的醫(yī)學意義及其應用
　　第二節(jié) 細胞因子的誘導表達
　　　一、白細胞介素類的誘生
　　　二、集落刺激因子類的誘生
　　　三、腫瘤壞死因子的誘生
　　　四、干擾素的誘生和制備
　　第三節(jié) 細胞因子的效價測定
　　　一、細胞因子效價測定的原理
　　　二、細胞因子效價測定方法
　第十九章 細胞基因分離鑒定和原位雜交
　　第一節(jié) 細胞DNA、RNA的分離鑒定技術
　　　一、培養(yǎng)細胞基因組DNA的提取及鑒定
　　　二、培養(yǎng)細胞總RNA的提取及鑒定
　　第二節(jié) 核酸、蛋白質轉移電泳及雜交
　　　一、DNA Southern Blot及雜交
　　　二、RNA Northern Blot及雜交
　　　三、蛋白質Western Blot及分析
　　第三節(jié) 熒光定量PCR技術
　　　一、主要應用技術原理和特點
　　　二、實驗儀器
　　　三、熒光定量的主要應用領域
　　第四節(jié) 細胞的原位雜交技術
　　　一、探針的制備原則和選擇
　　　二、載玻片和蓋玻片的預處理
　　　三、組織細胞固定
　　　四、原位雜交
　第二十章 基因細胞內(nèi)轉導技術
　　　一、基本概念
　　　二、物理、化學法基因轉染技術
　　　三、逆轉錄病毒載體介導DNA轉染
　　　四、轉染細胞鑒定
　第二十一章 流式細胞儀技術
　　　一、樣品的制備
　　　二、懸浮細胞的固定
　　　三、流式細胞儀分析的應用
第三篇 細胞工程生產(chǎn)應用技術
　第二十二章 大規(guī)模生產(chǎn)細胞技術
　　第一節(jié) 培養(yǎng)要素控制及其參數(shù)的測定
　　　一、細胞的定量測定
　　　二、培養(yǎng)要素控制
　　第二節(jié) 大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)應采取的措施
　　第三節(jié) 大規(guī)模生產(chǎn)細胞的方法
　　　一、單層靜置貼壁培養(yǎng)法
　　　二、固定化培養(yǎng)法
　　　三、懸浮培養(yǎng)
　第二十三章 細胞工程的應用
　　第一節(jié) 在細胞生物學、組織胚胎學和藥學方面的應用
　　　一、在細胞生物學方面的應用
　　　二、在組織胚胎學方面的應用
　　　三、在藥物學和藥理學方面的應用
　　第二節(jié) 在腫瘤研究方面的應用
　　　一、腫瘤病因和發(fā)病機制的研究
　　　二、抗癌藥物篩選方面的研究
　　　三、癌基因和抑癌基因方面的研究
　　　四、癌細胞的誘導分化和逆轉方面的研究
　　　五、癌細胞的殺傷效應的研究
　　第三節(jié) 在免疫學中的應用
　　　一、免疫細胞表面標記和功能的常規(guī)檢測
　　　二、白細胞分化抗原的分類和主要特征
　　　三、單核吞噬細胞的培養(yǎng)和功能的測定
　　　四、免疫細胞毒試驗
　　　五、在HLA抗原檢測中的應用
　　　六、在器官和組織移植免疫中的應用
　　第四節(jié) 在臨床各科中的應用
　　　一、在外科的應用
　　　二、在內(nèi)科的應用
　　　三、在婦產(chǎn)科的應用
附錄
　附錄1 人和動物的主要細胞系（株）
　附錄2 離心速度和離心力換算表
　附錄3 常用人工合成細胞培養(yǎng)基
　附錄4 細胞培養(yǎng)常用名詞解釋
　附錄5 細胞培養(yǎng)常用的溶液
　附錄6 中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫可供細胞目錄
　附錄7 中國科學院上海細胞生物學研究所細胞庫可供細胞目錄
參考文獻