流式細胞術基本原理與實用技術

第1章　流式細胞儀基本結構與原理
1.1 流式細胞儀基本結構與功能
1.1.1 流式細胞儀基本結構
1.1.2 流式細胞儀的基本功能與應用
1.2 流式細胞術的重要術語
1.2.1 前向散射與側向散射
1.2.2 Coulter效應與電子體積
1.2.3 熒光信號及其面積與寬度
1.2.4 光譜重疊與熒光補償
1.2.5 細胞基礎熒光域值與陰性對照置信區(qū)間
1.3 流式細胞術基本原理
1.3.1 流式細胞術分析的基本原理
1.3.2 流式細胞術分選的基本原理
1.3.3 流式細胞儀熒光補償設置
1.4 流式細胞術的樣本設置
1.4.1 常用對照
1.4.2 一套完整的流式細胞術檢測樣本設置
1.5 流式細胞術的數(shù)據(jù)分析
1.5.1 數(shù)據(jù)顯示與分析
1.5.2 設門
1.5.3 數(shù)據(jù)分析中幾種常見圖形及分析原則
第2章　抗原抗體反應基本特點與流式抗體及熒光染料的選擇
2.1 抗原抗體反應基本特點
2.1.1 抗原抗體結合具有特異性
2.1.2 抗原與抗體的結合是可逆的化學反應
2.2 抗原抗體反應影響因素
2.2.1 電解質
2.2.2 反應溫度與時間
2.2.3 pH值
2.3 流式抗體的選擇
2.3.1 盡量使用直標抗體
2.3.2 注意流式抗體的應用級別
2.3.3 抗體滴度或標記量的選擇
2.3.4 根據(jù)流式細胞儀的類型及熒光素的熒光光譜選擇熒光抗體
2.3.5 根據(jù)檢測物（抗原）表達量選擇熒光染料
2.4 熒光染料特性及其應用
2.4.1 抗體標記熒光染料特性及其應用
2.4.2 核酸熒光染料的特性及其應用
2.4.3 細胞膜及其他熒光探針的特性及其應用
第3章　細胞表面分子的檢測與分析
3.1 流式細胞術在細胞表面分子的檢測與分析中的應用
3.1.1 免疫細胞及其亞群的檢測與功能分析
3.1.2 血液系統(tǒng)細胞表面標志的研究
3.1.3 細胞群體及細胞表面標志變化的監(jiān)測
3.1.4 細胞表面標志構成性質的分析
3.2 標本制備
3.2.1 血液或骨髓標本的制備
3.2.2 體液、灌洗液或懸浮培養(yǎng)細胞的制備
3.2.3 貼壁細胞的制備
3.2.4 組織標本的制備
3.3 細胞表面分子免疫標記方法
3.3.1 直接免疫熒光法
3.3.2 間接免疫熒光法
3.3.3 全血直接標記法
3.3.4 直接與間接免疫熒光混合染色法
3.4 常用的免疫細胞表面標志的檢測與分析
3.4.1 T淋巴細胞及其亞類檢測
3.4.2 B淋巴細胞及其亞類檢測
3.4.3 NK細胞與NKT細胞檢測
第4章　細胞內或細胞核內抗原檢測與分析
4.1 流式細胞術分析細胞內或細胞核內抗原基本步驟
4.1.1 細胞固定劑和穿膜劑的選擇
4.1.2 最佳抗體濃度的選擇
4.1.3 細胞膜內外FCR的封閉
4.2 胞內抗原的檢測與分析——胞內細胞因子的檢測與分析
4.3 核內抗原的檢測與分析——調節(jié)性T細胞（Treg，CD4+CD25+Foxp3+）的檢測與分析
第5章　細胞凋亡的檢測與分析
5.1 樣品來源與收集
5.2 PI單染法——亞“G1”峰檢測法
5.3 Annexin-V-PI復染法
5.4 末端轉移酶標記技術（TUNEL）
5.5 細胞周期特異性細胞凋亡的檢測（PI-Annexin-V，PA法）
第6章　DNA含量檢測與細胞周期的分析
6.1 常用DNA和RNA染料
6.2 DNA倍體分析在腫瘤診斷和治療中的意義
6.2.1 DNA倍體分析的判定標準
6.2.2 DNA倍體分析在腫瘤診斷和治療中的意義
6.3 細胞DNA檢測的內參考標準
6.3.1 雞紅細胞
6.3.2 人淋巴細胞
6.3.3 鱉紅細胞
6.4 DNA樣品的制備和檢測
6.4.1 DNA樣品的制備和檢測的影響因素與注意事項
6.4.2 培養(yǎng)細胞或懸浮樣品的DNA含量檢測
6.4.3 新鮮組織細胞核的DNA含量檢測
6.4.4 石蠟包埋組織塊切片的DNA含量檢測
6.4.5 FCM在腫瘤脫落細胞學檢查的應用
6.5 數(shù)據(jù)采集后的軟件分析
6.5.1 運用ModFit LT進行自動分析
6.5.2 運用ModFit LT進行手動分析
6.5.3 運用ModFit進行同步化分析
6.5.4 運用ModFit LT進行增殖分析
6.6 藥物對細胞周期的影響
6.7 流式細胞核型分析
6.8 FCM-DNA檢測的質量控制
6.8.1 標本采集和固定方法的質控
6.8.2 單細胞懸液制備的質控制備
6.8.3 石蠟包埋組織單細胞懸液制備的質控
6.8.4 脫落細胞樣品的采集
6.8.5 細胞懸液熒光染色的質控
6.8.6 流式細胞儀器操作技術質控
6.8.7 流式細胞分析資料處理的質控
6.8.8 定量熒光細胞染色技術的評價標準
第7章　細胞增殖的檢測與分析
7.1 以檢測細胞增殖抗原標志物為基礎的分析法
7.1.1 BrdU／DNA雙參數(shù)法
7.1.2 Ki-67檢測與分析
7.1.3 PCNA／DNA雙參數(shù)法
7.1.4 Cyclins／DNA雙參數(shù)法
7.2 以檢測細胞分裂情況為基礎的分析法
7.2.1 檢測細胞增殖的常用熒光染料及其分析原理
7.2.2 以檢測細胞分裂情況為基礎的分析法的應用
第8章　細胞毒的檢測與分析
8.1 體外細胞毒檢測方法
8.1.1 CFSE／PI或PKH-67／PI檢測法
8.1.2 GFP／PI檢測法——以NK殺傷活性為例
8.2 體內CTL細胞毒檢測方法——CFSE標記法
第9章　可溶性蛋白質分子的檢測與分析
9.1 可溶性蛋白質分子的定性、定量檢測與分析
9.2 可溶性蛋白質分子的定量檢測與分析——液相芯片技術（LabMAPTM和CBA技術）
9.2.1 液相芯片技術的基本原理
9.2.2 液相芯片的技術優(yōu)勢
9.2.3 液相芯片的主要實驗步驟
9.2.4 LabMAPTM技術
9.2.5 BD微球陣列分析技術（CBA技術）
第10章　報告基因的檢測和分析
10.1 報告基因GFP及其突變體
10.2 報告基因GFP及其突變體在生物學中的應用
10.2.1 篩選新的藥物
10.2.2 發(fā)育分子機理研究
10.2.3 細胞篩選或分選標記物
10.2.4 基因產物功能及基因定位研究
10.2.5 細胞功能活動的動態(tài)觀察
10.2.6 細胞、分子之間的相互作用研究
10.2.7 體內示蹤與應用
10.2.8 在RNA干擾與核酶體研究中的應用
10.2.9 免疫反應示蹤標志物
10.2.10 在細胞凋亡相關基因研究中的應用
10.3 報告基因（GFP）的檢測與分析
10.3.1 報告基因轉染效率和（或）GFP融合蛋白表達的檢測與分析
10.3.2 GFP融合基因的細胞周期檢測與分析——GFP／PI雙標記法
10.3.3 在細胞凋亡相關基因研究中的應用一GFP／Annexin-V／PI三色標記法
第11章　其他流式細胞術應用技術
11.1 胞內活性氧水平的檢測與分析
11.1.1 DCFH-DA單染色法
11.1.2 DCFH／PI染色法
11.1.3 雙氫羅丹明（Rhodamine）123染色法
11.2 細胞膜電位的檢測與分析
11.2.1 檢測細胞膜電位的染料及其檢測原理
11.2.2 Cyanine（花青苷）染色法
11.2.3 羅丹明123染色法
11.2.4 JC-1染色法
11.3 細胞內鈣離子濃度的檢測與分析
11.3.1 檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針與檢測原理
11.3.2 細胞內鈣離子濃度的檢測與分析——Fluo-3／AM染色法
11.4 熒光共振能量轉移技術及應用
11.5 干細胞（SP）的檢測——Hoechst33342法
第12章　流式細胞儀的發(fā)展和商品化儀器
12.1 流式細胞儀的發(fā)展歷史和趨勢
12.1.1 專業(yè)化的流式細胞儀紛紛面世
12.1.2 儀器全面自動化
12.1.3 多色多參數(shù)分析迅速發(fā)展
12.2 流式細胞儀商品儀器概述
12.2.1 激發(fā)光源及其熒光染料
12.2.2 液流系統(tǒng)
12.2.3 信號檢測和光電轉換
12.2.4 分選系統(tǒng)
12.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析
12.2.6 流式微球芯片
12.2.7 圖像流式細胞儀
12.3 流式細胞儀的主要技術指標
12.3.1 熒光分辨率
12.3.2 熒光靈敏度
12.3.3 前向角散射光靈敏度
12.3.4 前向角散射光分辨率
12.3.5 分析速度
12.3.6 分選指標
附錄1 常見流式細胞術及熒光顯微鏡熒光染料激發(fā)波長與發(fā)射波長快查表
附錄2
2.1 常用溶液的配制
2.2 Hanks液的配制
2.3 磷酸鹽緩沖液（PB）的配制
參考文獻