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MITA介導(dǎo)的細(xì)胞抗病毒反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機(jī)制

MITA介導(dǎo)的細(xì)胞抗病毒反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機(jī)制

定 價(jià):¥28.00

作 者: 鐘波 著
出版社: 武漢大學(xué)出版社
叢編項(xiàng): 武漢大學(xué)優(yōu)秀博士學(xué)位論文文庫
標(biāo) 簽: 暫缺

ISBN: 9787307117136 出版時(shí)間: 2013-11-01 包裝: 平裝
開本: 16開 頁數(shù): 162 字?jǐn)?shù):  

內(nèi)容簡介

  長期以來,病毒感染與宿主免疫的機(jī)制一直是生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。病毒入侵宿主細(xì)胞后,首先被宿主模式識(shí)別受體(pattern—recognition receptors,PRRs)所識(shí)別,激活一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),誘導(dǎo)I型干擾素和白細(xì)胞介素113(interleukin 1—β,IL—1β)等細(xì)胞因子的表達(dá)。這些細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外,與細(xì)胞表面受體結(jié)合,激活相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),誘導(dǎo)大量抗病毒基因的表達(dá),從而抑制病毒的復(fù)制,誘導(dǎo)被感染的細(xì)胞凋亡;同時(shí),這些細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥反應(yīng),激活天然免疫細(xì)胞以及適應(yīng)性免疫系統(tǒng),從而殺滅病毒并清除病毒感染的細(xì)胞。因此,I型干擾素等細(xì)胞因子的表達(dá)對宿主抵抗病毒入侵起著舉足輕重的作用。研究表明,病毒在感染與復(fù)制的過程中產(chǎn)生病原相關(guān)分子模式(pathogen—associated molecular patterns,PAMPs),如5’三磷酸具有鍋柄狀結(jié)構(gòu)的RNA(5’PPP panhandle RNA)以及雙鏈RNA(double—stranded RNA,dsRNA)。宿主細(xì)胞內(nèi)的PRR如RIG—I(retinoic acid—inducible gene I)與MDA5(melanoma differentiation—associated gene5)識(shí)別相應(yīng)的PAMP后構(gòu)象發(fā)生變化,招募定位于線粒體的接頭蛋白VISA(virus—induced signaling adaptor)。VISA通過與TRAF6(tumor necrosis factor receptor—associated factor 6)或TRAF2相互作用,激活I(lǐng)KK(inhibitor of KB kinase)復(fù)合物,IKK復(fù)合物磷酸化IKB(inhibitor of KB),使IKB經(jīng)泛素一蛋白酶體途徑降解,釋放出轉(zhuǎn)錄因子NF—KB。同時(shí)VISA與TRAF3以及TBKl(TRAF family member—as—sociated NF—KB activator—binding kinase 1)相互作用,促進(jìn)TBKl磷酸化激活I(lǐng)RF3(interferon—regulatory factor 3)。激活的轉(zhuǎn)錄因子如IRF3與NF—KB進(jìn)入細(xì)胞核結(jié)合至I型干擾素等基因的啟動(dòng)子上,激活I(lǐng)型干擾素的轉(zhuǎn)錄。盡管最近十年的研究初步揭示了病毒感染誘導(dǎo)I型干擾素產(chǎn)生的過程,但是仍然有很多未知的問題有待進(jìn)一步研究。例如,VISA通過保守的TRAF相互作用位點(diǎn)與TRAF6和TRAF2相互作用激活NF—KB,而VISA如何與TBKl相互作用并進(jìn)一步激活I(lǐng)RF3則并不清楚。此外,DNA病毒的受體及其介導(dǎo)I型干擾素的機(jī)制是什么,細(xì)胞中是否存在其它未知的激活I(lǐng)型干擾素的蛋白等。為了尋找參與激活I(lǐng)型干擾素表達(dá)的蛋白,我們利用表達(dá)克隆的方法篩選了人脾臟cDNA表達(dá)文庫,發(fā)現(xiàn)一個(gè)功能未知的蛋白能有效激活I(lǐng)RF3,我們將其命名為MITA(mediator of IRF3 activator)。研究表明,MITA能有效激活轉(zhuǎn)錄因子IRF3而不激活NF—KB。RNAi下調(diào)MITA的表達(dá)則抑制病毒誘導(dǎo)的IRF3和NF—KB的激活、IFN—β等抗病毒基因的表達(dá)以及細(xì)胞抗病毒反應(yīng)。MITA的N端含有四個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,其中第三個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(aalll—150)對其線粒體定位、與VISA相互作用以及自身的多聚化非常重要,第二個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)與第三個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)之間的部分(aa81—110)對促進(jìn)TBK1—IRF3相互作用是必需的。內(nèi)源性免疫沉淀實(shí)驗(yàn)表明,MITA持續(xù)性地與V[SA和IRF3相互作用,病毒感染后,MITA將TBK1招募至線粒體,介導(dǎo)VISA—TBKl相互作用;同時(shí),MITA通過自身多聚化形成VISA—MITA—BK1—IRF3復(fù)合物。在這一復(fù)合物中,MITA第358位的絲氨酸被TBKl磷酸化,這一過程為IRF3的磷酸化激活非常重要。

作者簡介

  鐘波,男,2010年畢業(yè)于武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)專業(yè),獲博士學(xué)位。論文獲全國優(yōu)秀博士學(xué)位論文獎(jiǎng)。現(xiàn)在武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院工作。博士學(xué)位論文指導(dǎo)老師:舒紅兵。

圖書目錄

第一章 研究背景
第一節(jié) 抗病毒天然免疫概述
一、天然免疫簡介
二、抗病毒天然免疫反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)概述
三、I型干擾素轉(zhuǎn)錄激活機(jī)制
第二節(jié) PRRs及其介導(dǎo)的天然抗病毒免疫反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
一、識(shí)別病毒的模式識(shí)別受體及其對病毒的識(shí)別
二、PRRs協(xié)同作用介導(dǎo)細(xì)胞抗病毒反應(yīng)
三、PRRs介導(dǎo)的細(xì)胞抗病毒反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
第三節(jié) PRRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)機(jī)制
一、阻斷介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子間的相互作用
二、降解介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白
三、調(diào)節(jié)信號(hào)分子的去泛素化
四、其他
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
一、熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)相關(guān)材料
二、細(xì)胞、細(xì)胞因子與細(xì)胞培養(yǎng)
三、載體構(gòu)建所需材料
四、酵母雙雜交所需材料
五、免疫共沉淀以及Western blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
一、質(zhì)粒構(gòu)建、DNA純化、磷酸鈣沉淀轉(zhuǎn)梁293細(xì)胞、免疫共沉淀、Westem blot與RNA blot
二、熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
三、表達(dá)克隆篩選
四、酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)
五、亞細(xì)胞器分離實(shí)驗(yàn)
六、RT-PCR實(shí)驗(yàn)
七、VSV空斑實(shí)驗(yàn)
八、泛素化實(shí)驗(yàn)
九、LC-MS/MS鑒定MITA磷酸化位點(diǎn)
十、免疫熒光與激光共聚焦顯微鏡觀察
十一、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
十二、原代細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
十三、32P in vivo標(biāo)記細(xì)胞與放射自顯影實(shí)驗(yàn)
十四、體外泛素化實(shí)驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
第一節(jié) MITA介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
一、研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述
二、MITA的鑒定與表達(dá)分析
三、過表達(dá)MITA能有效激活I(lǐng)RF3
四、RNAi下調(diào)MITA的表達(dá)抑制seV誘導(dǎo)的IFN-B的表達(dá)
五、MITA定位于線粒體
六、MITA與VISA、RIG-I相互作用
七、MITA作為支架蛋白促進(jìn)TBK1-IRF3的相互作用
八、TBK1介導(dǎo)MITA的磷酸化促進(jìn)MITA對IRF3的激活
九、小結(jié)與討論
第二節(jié) RNF5對MITA介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)
一、研究背景和立項(xiàng)依據(jù)概述
二、RNF5是MITA相互作用蛋白
三、過表達(dá)RNF5抑制病毒感染引起的IFN-β的激活
四、RNAi下調(diào)RNF5的表達(dá)促進(jìn)病毒感染引起的IFN-β的激活
五、RNF5在MITA水平調(diào)節(jié)細(xì)胞抗病毒反應(yīng)
六、RNF5催化MITA泛素化降解
七、RNF5催化MITA泛素化發(fā)生在MITA K150
八、RNF5在線粒體泛素化MITA
九、小結(jié)與討論
第三節(jié) RNF5催化VISA泛素化降解
一、研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述
二、病毒感染誘導(dǎo)RNF5與VISA相互作用
三、RNF5誘導(dǎo)VISA通過泛素蛋白酶體途徑降解
四、RNF5泛素化VISA發(fā)生在K361和K462
五、RNF5對VISA的泛素化獨(dú)立于Itch
六、小結(jié)與討論
第四節(jié) 研究總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
致謝

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