生物化學與分子生物學實驗指導（第3版）

第一篇 生物化學與分子生物學實驗基本技術(shù)
第一章 生物化學實驗基本操作
第一節(jié) 實驗室規(guī)則
第二節(jié) 基本實驗操作
一、玻璃儀器的清洗
二、玻璃儀器的干燥
三、特殊污物的清洗
四、塑料器皿的清洗
五、刻度吸管的使用
六、可調(diào)式微量移液器的使用
七、溶液的混勻、加熱、保溫及冷卻
第三節(jié) 常用實驗儀器的使用
一、LD5-2A離心機的使用方法
二、Neofuge 13R臺式高速冷凍離心機使用方法
三、紫外／可見分光光度計的使用方法
第四節(jié) 常用實驗標本的制備
一、血液樣本的收集
二、尿液樣本的收集與保存
三、組織樣品的制備
第五節(jié) 實驗報告的書寫
一、實驗報告基本格式
二、書寫實驗報告應注意事項
第二章 分光光度技術(shù)
第一節(jié) 基本原理
一、光的一般知識
二、發(fā)射光譜與吸收光譜
三、朗伯-比爾定律
第二節(jié) 分光光度計的結(jié)構(gòu)
—、光源
二、分光系統(tǒng)
三、狹縫
四、吸收池
五、檢測系統(tǒng)
第三節(jié) 分光光度技術(shù)的應用
一、用于溶液中物質(zhì)的定量測定
二、用于溶液中物質(zhì)的定性測定
第三章 電泳技術(shù)
第一節(jié) 基本原理
一、電泳的概念
二、電泳的主要影響因素
第二節(jié) 電泳的分類
一、按分離目的分類
二、按分離原理分類
三、按支持介質(zhì)分類
四、其他分類
第三節(jié) 常用電泳技術(shù)
一、紙電泳
二、乙酸纖維素薄膜電泳
三、瓊脂糖凝膠電泳
四、聚丙烯酰胺凝膠電泳
五、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
六、等電聚焦電泳
七、雙向電泳
八、毛細管電泳
九、單細胞凝膠電泳
十、脈沖場凝膠電泳
十一、特殊電泳
第四章 層析技術(shù)
第一節(jié) 基本知識
一、層析的基本概念
二、層析技術(shù)的分類
三、層析的基本原理
第二節(jié) 離子交換層析
一、基本原理
二、離子交換介質(zhì)
三、分離過程
四、離子交換層析的應用
第三節(jié) 凝膠層析
一、基本原理
二、常用凝膠
三、凝膠層析的應用
第四節(jié) 親和層析
一、基本原理
二、基質(zhì)與配體的選擇
第五節(jié) 高效液相色譜
一、基本概念
二、基本裝置
第五章 離心技術(shù)
第一節(jié) 基本原理
一、離心機的力學原理
二、離心機的工作原理
第二節(jié) 離心機的類型
一、按速度分類
二、按用途分類
第三節(jié) 離心機使用及注意事項
一、離心機的使用
二、離心機使用及維護
三、離心過程留意觀察
四、離心完畢后精心處理
五、使用完畢認真登記
六、離心機常見故障及排除方法
第六章 透析技術(shù)
第一節(jié) 透析原理及影響因素
第二節(jié) 透析技術(shù)的應用
第三節(jié) 透析操作及注意事項
第七章 生物大分子制備
第一節(jié) 細胞破碎及細胞器分離
一、細胞破碎
二、細胞器分離
第二節(jié) 生物大分子的分離與純化
一、蛋白質(zhì)（酶）的分離與純化
二、核酸的分離與純化
第三節(jié) 提純后的處理
一、樣品的濃縮
二、樣品的干燥及貯存
第八章 分子生物學基本技術(shù)原理
第一節(jié) 核酸分子雜交
一、核酸分子雜交的基本理論
二、核酸分子探針
三、核酸分子雜交的種類與方法
第二節(jié) DNA克隆技術(shù)基本原理
一、獲取目的基因
二、構(gòu)建基因載體
三、限制性內(nèi)切核酸酶的作用
四、DNA分子重組
五、重組DNA分子導入宿主細胞
六、陽性重組體的篩選和鑒定
七、克隆基因的表達
第三節(jié) 聚合酶鏈反應
一、基本原理與方法
二、PCR技術(shù)的應用
第四節(jié) 實時定量PCR
一、Ct值定量原理
二、實時定量PCR熒光標記方法
三、實時定量PCR技術(shù)的應用
第五節(jié) 反轉(zhuǎn)錄PCR
一、模板RNA
二、反轉(zhuǎn)錄引物
三、反轉(zhuǎn)錄酶
四、離子強度
五、脫氧核苷三磷酸底物
第六節(jié) western印跡
一、蛋白質(zhì)凝膠電泳
二、轉(zhuǎn)膜
三、封閉
四、免疫雜交與顯色
第二篇 生物化學與分子生物學教學實驗
第九章 基本理論實驗
實驗一 蛋白質(zhì)的沉淀、變性及等電點的測定
一、蛋白質(zhì)的沉淀與變性
二、蛋白質(zhì)等電點的測定
實驗二 理化因素對唾液淀粉酶活性的影響
實驗三 琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用
實驗四 脂肪酸的β-氧化作用——酮體的生成和利用
實驗五 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定（賴氏法）
第十章 基本技術(shù)實驗
實驗六 蛋白質(zhì)的透析
實驗七 蛋白質(zhì)的定量測定（一）：酚試劑法（改良Lowry法）
實驗八 蛋白質(zhì)的定量測定（二）：紫外分光光度法
實驗九 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳
實驗十 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳
實驗十一 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量
實驗十二 肌肉組織氨基移換作用（紙層析法）
實驗十三 胡蘿卜素的柱層析分離
實驗十四 堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測定
第十一章 綜合強化實驗
實驗十五 激素對血糖濃度的影響
一、血糖的定量測定——葡萄糖氧化酶法
二、胰島素、腎上腺素對血糖濃度的影響
實驗十六 血清γ-球蛋白的分離、純化及鑒定
實驗十七 核酸的制備及測定
第十二章 分子克隆技術(shù)基礎(chǔ)實驗
實驗十八 質(zhì)粒DNA的提取（堿裂解法）
實驗十九 限制性核酸內(nèi)切酶對質(zhì)粒DNA的酶切作用
實驗二十 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗二十一 感受態(tài)細菌的制備及質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
實驗二十二 核酸的分子雜交
實驗二十三 聚合酶鏈反應體外擴增DNA（PCR）
實驗二十四 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）
實驗二十五 實時定量PCR（Real-time PCR）
實驗二十六 蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）
第十三章 學生設計性實驗
第一節(jié) 設計性實驗概述
一、設計性實驗的概念
二、學生設計性實驗的基本程序
第二節(jié) 設計性實驗的選題和設計
一、設計性實驗的選題
二、實驗設計與實施
第三節(jié) 數(shù)據(jù)的記錄與處理
一、實驗研究的觀察記錄
二、實驗數(shù)據(jù)的處理
第四節(jié) 實驗報告和論文的撰寫
一、實驗報告的撰寫
二、科研論文撰寫
第五節(jié) 設計性實驗教學組織案例
第三篇 生物化學與分子生物學常用資料及數(shù)據(jù)
第十四章 化學試劑分級及注意事項
第一節(jié) 一般化學試劑的分級
一、化學試劑的分級
二、易變質(zhì)及需要特殊方法保存的試劑
第二節(jié) 試劑配制的一般注意事項
第十五章 常用試劑配制
第一節(jié) 生物化學與分子生物學實驗中常用試劑的配制
一、有機試劑的配制
二、細菌培養(yǎng)基和抗生素的配制
三、生化實驗中常用緩沖液配制
四、常用電泳緩沖液
五、常用凝膠上樣緩沖液的配制
六、常用貯存液的配制
七、細菌的保存
第二節(jié) 重鉻酸洗液的配制與再生
附錄 常用的生物化學與分子生物學相關(guān)網(wǎng)站
一、國內(nèi)網(wǎng)站
二、國外網(wǎng)站