醫(yī)學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)實驗（第3版）

目錄
第一篇 基礎(chǔ)實驗
第一章 醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)基本實驗 1
第一節(jié) 細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu) 1
實驗一 細(xì)胞的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 1
實驗二 細(xì)胞的顯微測量技術(shù) 6
第二節(jié) 細(xì)胞生理活動 8
實驗三 胞質(zhì)環(huán)流 8
實驗四 細(xì)胞吞噬 9
實驗五 細(xì)胞活性鑒定 11
實驗六 細(xì)胞融合 12
第三節(jié) 細(xì)胞化學(xué)成分的顯示 14
實驗七 普通細(xì)胞化學(xué) 15
實驗八 核酸細(xì)胞化學(xué) 21
實驗九 酶細(xì)胞化學(xué) 25
實驗十 熒光細(xì)胞化學(xué)與免疫熒光細(xì)胞化學(xué) 28
第四節(jié) 細(xì)胞增殖 34
實驗十一 無絲分裂 34
實驗十二 有絲分裂 35
實驗十三 減數(shù)分裂 39
實驗十四 X染色質(zhì)標(biāo)本制備與觀察 42
實驗十五 早熟染色體凝集的誘導(dǎo)和觀察 43
第五節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng) 46
實驗十六 原代細(xì)胞培養(yǎng) 47
實驗十七 細(xì)胞傳代培養(yǎng) 49
實驗十八 體外培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法 53
第二章 醫(yī)學(xué)生物化學(xué)基本實驗 59
第一節(jié) 蛋白定量分析實驗 59
實驗一 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量 59
實驗二 Folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量 60
實驗三 考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量 61
實驗四 紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量 62
第二節(jié) 層析分離純化實驗 64
實驗五 血清γ-球蛋白的分離純化與鑒定 64
實驗六 葡聚糖凝膠分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶混合液 67
實驗七 離子交換層析分離混合氨基酸 68
第三節(jié) 電泳分析實驗 69
實驗八 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳 69
實驗九 血漿脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 71
實驗十 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清LDH同工酶 72
實驗十一 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子量 75
實驗十二 等電聚焦法測定蛋白質(zhì)等電點 77
第四節(jié) 酶學(xué)實驗 79
實驗十三 pH對酶促反應(yīng)速度的影響 79
實驗十四 溫度對酶促反應(yīng)速度的影響 82
實驗十五 底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響 83
實驗十六 抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響 85
實驗十七 酶的提取及比活性測定 87
第五節(jié) 物質(zhì)代謝實驗 92
實驗十八 胰島素對血糖含量的影響 92
實驗十九 鄰甲苯胺法測血糖含量 92
實驗二十 糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定 93
實驗二十一 血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定 95
實驗二十二 血清脂類含量分析 97
第三章 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)基本實驗 100
第一節(jié) 基因克隆實驗 100
實驗一 質(zhì)粒DNA的限制性酶切反應(yīng) 101
實驗二 瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定酶切的線性DNA片段 104
實驗三 DNA酶切片段的回收 107
實驗四 DNA片段的體外連接 109
實驗五 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 111
實驗六 重組DNA的轉(zhuǎn)化及陽性克隆的初步篩選 112
實驗七 陽性重組子的鑒定 114
實驗八 堿裂解法質(zhì)粒DNA的小量制備 115
實驗九 質(zhì)粒DNA濃度和純度的測定 117
第二節(jié) 外源基因GFP在原核細(xì)胞中的誘導(dǎo)表達(dá)和純化 117
實驗十 外源基因在大腸桿菌的誘導(dǎo)表達(dá)和提取 118
實驗十一 親和層析法純化重組蛋白 119
實驗十二 SDS-PAGE鑒定重組蛋白質(zhì) 119
第三節(jié) PCR技術(shù) 121
實驗十三 PCR擴(kuò)增目的基因 123
實驗十四 總RNA提取及RT-PCR擴(kuò)增目的基因 124
實驗十五 實時定量PCR分析真核基因的表達(dá) 128
第四章 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基本實驗 130
第一節(jié) 細(xì)胞遺傳學(xué)實驗 130
實驗一 人類外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng) 130
實驗二 人類外周血淋巴細(xì)胞染色體的制備 131
實驗三 人類染色體G顯帶 133
實驗四 人類G顯帶染色體核型分析 134
實驗五 姐妹染色單體交換（SCE）標(biāo)本的制備與觀察 136
第二節(jié) 分子遺傳學(xué)實驗 138
實驗六 短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）的多態(tài)性分析 138
實驗七 限制性片段長度多態(tài)（RFLP）分析 143
實驗八 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）的檢測 145
第三節(jié) 人類遺傳性狀分析 148
實驗九 遺傳性狀基因型與表型分析 148
實驗十 遺傳病的家系分析和再發(fā)風(fēng)險估計 151
第二篇 綜合實驗
第五章 細(xì)胞增殖活力分析 153
第一節(jié) 細(xì)胞增殖的定量分析 153
實驗一 細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性檢測（MTT法） 153
實驗二 細(xì)胞周期的檢測 154
第二節(jié) 細(xì)胞內(nèi)ATP含量測定 155
實驗三 人淋巴細(xì)胞ATP活力檢測 155
第三節(jié) 細(xì)胞增殖的染色分析 156
實驗四 BrdU染色法檢測細(xì)胞增殖 156
實驗五 Ki-67免疫染色法檢測細(xì)胞增殖 157
第六章 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)與檢測 160
第一節(jié) 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)與形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 160
實驗一 培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo) 161
實驗二 錐蟲藍(lán)染色檢測凋亡細(xì)胞 162
實驗三 蘇木精-伊紅染色檢測凋亡細(xì)胞 163
實驗四 Giemsa染色檢測凋亡細(xì)胞 164
實驗五 吖啶橙熒光染色檢測凋亡細(xì)胞 165
實驗六 Ho.33342與PI熒光雙染檢測凋亡細(xì)胞 165
第二節(jié) 凋亡細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察 167
實驗七 透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞 167
實驗八 掃描電鏡觀察凋亡細(xì)胞 168
第三節(jié) 凋亡細(xì)胞的定量分析 169
實驗九 流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡細(xì)胞 169
第四節(jié) 細(xì)胞凋亡的分子生物學(xué)特征 171
實驗十 凋亡細(xì)胞DNA ladder檢測 172
實驗十一 Caspase 3酶活性測定 172
實驗十二 凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測 173
實驗十三 凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)檢測 174
第七章 細(xì)胞自噬與相關(guān)分析 178
第一節(jié) 細(xì)胞自噬的形態(tài)學(xué)分析 178
實驗一 透射電鏡觀察自噬體的形成 179
實驗二 GFP-LC3自噬斑點的熒光顯微鏡檢測 180
第二節(jié) 自噬標(biāo)志蛋白的表達(dá)分析 181
實驗三 蛋白質(zhì)印跡法檢測自噬標(biāo)志蛋白的變化 181
第八章 真核生物基因表達(dá)調(diào)控分析 183
實驗一 甲基化特異性PCR（MSP）檢測基因啟動子甲基化 183
實驗二 熒光素酶報告基因瞬時轉(zhuǎn)染分析啟動子活性 186
第九章 四氯化碳致培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷的分析 193
第一節(jié) 培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷模型的誘導(dǎo)與形態(tài)學(xué)分析 193
實驗一 肝細(xì)胞損傷的誘導(dǎo)及常規(guī)形態(tài)檢查 193
實驗二 損傷細(xì)胞的脂肪變性檢測 194
第二節(jié) 肝細(xì)胞損傷的定量分析 195
實驗三 CCK法檢測細(xì)胞存活率 196
第三節(jié) 損傷肝細(xì)胞相關(guān)酶的分析 197
實驗四 肝損傷細(xì)胞乳酸脫氫酶活性檢測 198
實驗五 肝損傷細(xì)胞谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性檢測 199
實驗六 肝細(xì)胞中PPAR γ1表達(dá)水平的檢測 201
第十章 人遺傳性狀基因的分子診斷與應(yīng)用 201
實驗一 Duchenne型肌營養(yǎng)不良的基因診斷 201
實驗二 多重RT-PCR檢測染色體易位 202
實驗三 利用短串聯(lián)重復(fù)序列進(jìn)行親權(quán)鑒定 205
第三篇 創(chuàng)新實驗
實驗一 糖尿病的生化及遺傳檢測分析實驗 207
實驗二 唐氏綜合征的產(chǎn)前診斷方法 208
實驗三 家族性高膽固醇血癥的診斷方法 208
實驗四 血友病的診斷 210
實驗五 重組人促紅細(xì)胞生成素在細(xì)胞中的表達(dá)、分離和純化 210
實驗六 p53基因與腫瘤相關(guān)性實驗設(shè)計 211
實驗七 小鼠組織細(xì)胞形態(tài)及功能分析 212
實驗八 小鼠組織特種細(xì)胞的形態(tài)及特征性成分的鑒定 212
附錄
附錄一 實驗室規(guī)則 213
附錄二 實驗室安全及防護(hù) 213
附錄三 實驗室常用玻璃儀器的洗滌與清潔 214
附錄四 生物繪圖的要求與方法 217
附錄五 生物學(xué)實驗設(shè)計報告 218
附錄六 常用實驗技術(shù)原理 218