百合抗病細胞工程育種與實踐

目錄
前言
第1章 緒論 1
1.1 百合枯萎病 1
1.1.1 癥狀和特點 1
1.1.2 病原 2
1.1.3 發(fā)病規(guī)律 5
1.1.4 綜合防治 5
1.2 體細胞無性系誘變篩選抗病種質(zhì)的相關(guān)進展 8
1.2.1 體細胞無性系變異 8
1.2.2 離體篩選的原理、程序和選擇方法 8
1.2.3 離體誘變育種 9
1.3 百合組織培養(yǎng)研究進展 14
1.4 植物細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)研究進展 15
1.4.1 愈傷組織的誘導(dǎo) 15
1.4.2 影響懸浮細胞系建立的因子 16
1.5 尖孢鐮刀菌抗性機制的研究進展 17
1.5.1 尖孢鐮刀菌抗性機制的細胞學(xué)研究 17
1.5.2 尖孢鐮刀菌抗性機制的生理學(xué)研究 18
1.5.3 尖孢鐮刀菌抗性機制的分子基礎(chǔ)研究 19
1.6 尖孢鐮刀菌毒素作用機制的研究 22
第2章 百合懸浮細胞系的建立 25
2.1 懸浮細胞系的初始建立 25
2.2 繼代次數(shù)與細胞形態(tài)之間的關(guān)系 26
2.3 關(guān)于百合細胞懸浮培養(yǎng)的討論 26
第3章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變系的篩選 28
3.1 尖孢鐮刀菌百合專化型毒素粗提液的活性和篩選壓的確定 29
3.1.1 尖孢鐮刀菌百合專化型毒素粗提液的活性 29
3.1.2 篩選壓的確定 31
3.2 百合抗尖孢鐮刀菌枯萎病無性系的篩選 31
3.3 百合抗尖孢鐮刀菌枯萎病無性系的抗病性鑒定 32
3.4 關(guān)于篩選抗病無性系的討論 34
3.4.1 真菌毒素及其篩選技術(shù) 34
3.4.2 突變體的鑒定技術(shù) 34
第4章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變系的組織細胞學(xué)抗性 35
4.1 抗病無性系和感病無性系的根部結(jié)構(gòu) 35
4.2 抗病無性系和感病無性系在接種以后根部的細胞超微結(jié)構(gòu)變化 36
4.3 關(guān)于抗病無性系組織抗性的討論 40
第5章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變系的生化抗性 41
5.1 抗病無性系和感病無性系的POD活性變化 42
5.2 抗病無性系和感病無性系的PAL活性變化 42
5.3 抗病無性系和感病無性系的PPO活性變化 43
5.4 抗病無性系和感病無性系的β-1，3-葡聚糖酶活性變化 44
5.5 抗病無性系和感病無性系的幾丁質(zhì)酶活性變化 44
5.6 關(guān)于抗病無性系生理抗性的討論 45
第6章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變系的轉(zhuǎn)錄組分析 46
6.1 樣品總RNA提取質(zhì)量分析 46
6.2 測序結(jié)果統(tǒng)計分析 47
6.3 組裝結(jié)果統(tǒng)計和評估 50
6.3.1 組裝結(jié)果統(tǒng)計 50
6.3.2 組裝結(jié)果評估 50
6.4 Unigene的功能注釋 52
6.4.1 ORF預(yù)測 52
6.4.2 SSR分析 52
6.4.3 差異表達基因聚類 52
6.5 SSR分析 57
6.6 百合抗病無性系和感病無性系及不同接種時間點差異基因分析 57
6.6.1 百合抗病無性系和感病無性系兩分組差異基因篩選 57
6.6.2 差異基因功能注釋及分類 59
6.7 Q-PCR 驗證 64
6.8 關(guān)于轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)旳應(yīng)用 65
6.9 關(guān)于Unigene的生物信息學(xué)的注釋 67
6.10 抗病性相關(guān)代謝路徑及差異基因分析 67
6.10.1 寄主植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 67
6.10.2 寄主植物與病原菌互作 68
6.10.3 細胞壁防衛(wèi)抗病途徑 68
第7章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變系的蛋白質(zhì)組分析 70
7.1 蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)的建立 71
7.1.1 百合總蛋白質(zhì)的提取方法 71
7.1.2 蛋白質(zhì)定量 71
7.1.3 蛋白質(zhì)質(zhì)量檢測 72
7.1.4 雙向電泳 72
7.1.5 染色及圖像采集分析 72
7.1.6 百合總蛋白質(zhì)提取方法的比較 73
7.1.7 百合總蛋白質(zhì)雙向電泳上樣量的優(yōu)化 74
7.1.8 百合總蛋白質(zhì)除鹽時間的優(yōu)化 75
7.2 百合雙向電泳差異蛋白質(zhì)組分析 76
7.2.1 百合葉片總蛋白質(zhì)的提取、定量 76
7.2.2 差異蛋白點處理及質(zhì)譜分析 76
7.2.3 數(shù)據(jù)庫檢索 76
7.2.4 百合抗病無性系和感病無性系的雙向電泳圖譜分析 77
7.2.5 百合抗病無性系和感病無性系的蛋白質(zhì)功能鑒定及豐度變化分析 83
7.3 iTRAQ蛋白質(zhì)組分析 83
7.3.1 蛋白質(zhì)的提取、濃度測定及檢測 83
7.3.2 iTRAQ標(biāo)記分析 84
7.3.3 差異蛋白分析 86
7.3.4 GO 功能分類富集分析 87
7.3.5 代謝途徑分析 90
7.4 關(guān)于百合蛋白質(zhì)提取及雙向電泳技術(shù)優(yōu)化的問題 94
7.5 百合蛋白質(zhì)雙向電泳差異蛋白的抗病性 95
7.5.1 光合作用和能量代謝相關(guān)蛋白參與百合的防衛(wèi)反應(yīng) 95
7.5.2 防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)蛋白是抗病的關(guān)鍵因素 96
7.5.3 可能與百合抗病無性系抗病性相關(guān)的其他蛋白質(zhì) 96
7.6 關(guān)于iTRAQ蛋白質(zhì)組分析的問題 96
參考文獻 98
附表 116