生物化學(xué)實驗教程（第二版）

第一篇生物化學(xué)實驗基礎(chǔ)


第1章生物化學(xué)實驗的基本知識(3)


1.1實驗室規(guī)范(3)


1.2玻璃儀器(6)


1.3生物化學(xué)實驗常用儀器(11)

第2章生物化學(xué)實驗的基本要求(19)


2.1實驗樣品的制備(19)

2.2實驗的準確性與誤差(24)

2.3實驗記錄和實驗報告(26)

第3章生物化學(xué)基本實驗技術(shù)(28)


3.1層析技術(shù)(28)

3.2電泳技術(shù)(36)

3.3離心技術(shù)(42)

3.4膜分離技術(shù)(49)

3.5光譜學(xué)技術(shù)(53)

3.6其他生物化學(xué)實驗技術(shù)(62)


第二篇生物化學(xué)實驗

第4章蛋白質(zhì)(73)

實驗1氨基酸和蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)(73)

實驗2蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(yīng)(77)

實驗3血清蛋白鹽析及分子篩層析脫鹽(79)

實驗4蛋白質(zhì)含量的測定(81)

Ⅰ雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量(81)

Ⅱ考馬斯亮藍結(jié)合法(Bradford法)測定蛋白質(zhì)含量(83)

Ⅲ紫外光吸收法測定蛋白質(zhì)含量(85)

Ⅳ微量凱氏定氮法測定總蛋白含量(86)

ⅤFolin酚法測定蛋白質(zhì)含量(88)

實驗5氨基酸的分離鑒定(90)

Ⅰ紙層析分離鑒定氨基酸(90)

Ⅱ離子交換層析分離混合氨基酸(91)

實驗6血清蛋白的醋酸纖維素薄膜電泳(93)

實驗7DNS氨基酸的制備和鑒定(95)

實驗8DNP氨基酸的制備和鑒定(98)

實驗9用DNS法鑒定蛋白質(zhì)或多肽的N端氨基酸(100)

實驗10SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳分離細菌總蛋白質(zhì)(102)

實驗11SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量(104)

實驗12牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定(108)

實驗13大豆蛋白的提取與含量測定(109)

實驗14葡聚糖凝膠層析法分離純化蛋白質(zhì)(111)

第5章核酸(114)

實驗15核酸含量的測定(114)

Ⅰ定磷法定量測定核酸(114)

Ⅱ地衣酚法定量測定RNA(116)

Ⅲ二苯胺法測定DNA含量(117)


實驗16過碘酸氧化法定量測定核苷酸(118)

實驗17酵母核糖核酸的分離及組分鑒定(121)

實驗18菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定(123)

實驗19動物肝臟中DNA的提取(125)

實驗20堿裂解法小量提取質(zhì)粒DNA(127)

實驗21DNA瓊脂糖凝膠電泳(128)


實驗22AMP、ADP和ATP的分離(130)

Ⅰ薄層層析分離AMP、ADP和ATP(130)

Ⅱ醋酸纖維素薄膜電泳鑒定AMP、ADP、ATP(132)

第6章酶學(xué)(134)


實驗23酶的特性實驗(134)

實驗24米氏常數(shù)測定(135)

Ⅰ脲酶米氏常數(shù)的簡易測定(135)

Ⅱ過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定(137)

Ⅲ胰蛋白酶米氏常數(shù)的測定(139)

實驗25酶活力的測定(140)

Ⅰ液化型淀粉酶活力的測定(140)

Ⅱ薄層層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶活性(142)

Ⅲ分光光度法測定血液中轉(zhuǎn)氨酶的活力(143)

實驗26酶的制備(146)

Ⅰ乳酸脫氫酶粗提液的制備及活力測定(146)

Ⅱ枯草桿菌堿性磷酸酶的制備及酶活力的測定(147)

Ⅲ馬鈴薯多酚氧化酶的制備及性質(zhì)實驗(150)

實驗27酶的固定化及對酶活性的影響(152)

實驗28琥珀酸脫氫酶競爭性抑制(154)

實驗29蔗糖酶相對分子質(zhì)量的測定(SDSPAGE電泳法)(156)

第7章維生素和輔酶(159)

實驗30紫外分光光度法測定魚肝油中維生素A的含量(159)

實驗31食物中脂溶性維生素含量分析(高效液相色譜)(160)

實驗32維生素B1的定性測定(163)


實驗33維生素B1的含量測定(164)

實驗34熒光光度法測定維生素B2的含量(166)

實驗35測定維生素C的含量(167)

Ⅰ2，6二氯酚靛酚滴定法測定維生素C的含量(167)

Ⅱ銅離子氧化法測定維生素C的含量(169)

Ⅲ磷鉬酸法測定維生素C的含量(170)

實驗36輔酶Q10的制備和檢測(172)

實驗37分離層析儀分離核黃素和血紅蛋白(174)

第8章生物能學(xué)和物質(zhì)代謝(177)

實驗38丙酮酸含量的測定(分光光度法)(177)

實驗39發(fā)酵過程中無機磷的利用(178)

實驗40肌糖原酵解作用(179)

實驗41糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定(181)

實驗42脂肪酸的β氧化(182)

實驗432,6二氯酚靛酚顯色反應(yīng)測定電子傳遞(184)

實驗44乳酸脫氫酶的遞氫作用(186)

實驗45氨基移換反應(yīng)(187)

第9章綜合性實驗(190)

實驗46糖的顏色反應(yīng)(190)

ⅠMolisch反應(yīng)鑒定醛糖(190)

ⅡSeliwanoff反應(yīng)鑒定酮糖(191)

ⅢTollen反應(yīng)鑒定戊糖(192)

實驗47血糖含量的測定(193)

ⅠFolinWu法測定血糖含量(193)

ⅡFolinMalmors法測定血糖含量(194)

Ⅲ鄰甲苯胺法測定血糖含量(196)

ⅣGODPAP法測定血糖含量(198)

實驗48總糖和還原糖含量的測定(199)

Ⅰ蒽酮比色法測定糖的含量(199)

Ⅱ斐林試劑比色法測定糖的含量(201)

Ⅲ3,5二硝基水楊酸比色法測定糖的含量(203)

實驗49脂類的測定(206)

Ⅰ索氏抽提法測定粗脂肪含量(206)

Ⅱ脂肪酸的測定(207)

Ⅲ血清甘油三酯簡易測定法(208)

Ⅳ醋酸酐法測定血清中膽固醇含量(210)

實驗50天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定(211)

Ⅰ多糖的提取、純化(211)

Ⅱ多糖的鑒定(212)

實驗51血清蛋白的分離、純化與鑒定(214)

實驗52凝膠層析法分離純化脲酶(217)

實驗53小麥萌發(fā)前、后淀粉酶活力的比較(220)

實驗54質(zhì)粒DNA的分離、純化及鑒定(222)

實驗55多聚酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)擴增目的基因片段(225)

實驗56重組質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化(227)

實驗57感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化(230)

實驗58DNA的酶切分析(231)

實驗59植物總黃酮的提取與測定(233)

實驗60蘆薈中活性成分的提取和純化(234)

Ⅰ蘆薈苷的提取和純化(234)

Ⅱ高速逆流色譜法分離蘆薈苷粗提物(236)

第10章設(shè)計性實驗(240)

實驗61半定量RTPCR檢測基因的表達差異(240)

實驗62卵磷脂的提取和鑒定(242)

實驗63強酸性陽離子交換樹脂在廢水處理中的應(yīng)用(244)

實驗64轉(zhuǎn)基因植物的PCR鑒定(246)

實驗65卵黃高磷蛋白的提取(247)

附錄(251)

附錄A緩沖液的配制(251)

附錄B常用實驗數(shù)據(jù)表(256)

附錄C硫酸銨飽和度常用表(261)

附錄D層析技術(shù)實驗數(shù)據(jù)(262)

參考文獻(265)