生物化學實驗（第六版）

目錄
第六版前言
第五版前言
第一章 糖類 1
實驗1 糖的顏色反應 1
實驗1.1 莫氏實驗 1
實驗1.2 塞氏實驗 2
實驗1.3 杜氏實驗 4
實驗2 糖的還原作用 5
實驗3 糖的旋光性和變旋現(xiàn)象 6
實驗4 血糖的定量測定（Folin-Wu法） 9
實驗5 血糖的定量測定（葡萄糖氧化酶法） 11
實驗6 血液中葡萄糖的測定（鄰甲苯胺法） 13
實驗7 植物組織中可溶性總糖的測定（蒽酮比色法） 15
實驗8 總糖和還原糖的測定（3， 5-二硝基水楊酸法） 18
實驗9 淀粉的制備與水解 20
實驗10 淀粉的分離純化及其組分含量的測定 22
實驗11 果膠的提取與果膠含量的測定 25
第二章 脂質 29
實驗12 脂肪的組成 29
實驗13 卵磷脂的提取和鑒定 31
實驗14 粗脂肪含量的測定（Soxhlet抽提法） 32
實驗15 碘價的測定（Hanus法） 35
實驗16 皂化價的測定 37
實驗17 脂肪酸價的測定 39
實驗18 脂肪乙酰價的測定 40
實驗19 血清膽固醇的定量測定（磷硫鐵法） 42
實驗20 血清總膽固醇的測定（鄰苯二甲醛法） 43
實驗21 血清膽固醇的定量測定（乙酸酐法） 45
實驗22 血清甘油三酯簡易測定法 47
實驗23 血清甘油三酯的測定（GPO-PAP法） 49
實驗24 丙二醛（MDA）的測定 51
第三章 蛋白質 55
實驗25 蛋白質的顏色反應 55
實驗26 蛋白質的沉淀反應 58
實驗27 蛋白質濃度測定（微量凱氏定氮法） 60
實驗28 蛋白質濃度測定（雙縮脲法） 63
實驗29 蛋白質濃度測定（Folin-酚試劑法） 65
實驗30 蛋白質濃度測定（紫外光吸收法） 66
實驗31 蛋白質濃度測定（考馬斯亮藍結合法） 68
實驗32 非蛋白氮（NPN）的測定 70
實驗33 甲醛滴定法 72
實驗34 DNP-氨基酸的制備和鑒定 73
實驗35 DNS-氨基酸的制備和鑒定 76
實驗36 用DNS法鑒定蛋白質或多肽的N-端氨基酸 79
實驗37 用DNS法測定多肽的氨基酸組成 82
實驗38 肽的序列分析（PTH法） 84
實驗39 尿素對蛋白質的變性作用 86
實驗40 氨基酸紙層析法 88
實驗41 氨基酸微晶纖維素薄板層析法 91
實驗42 離子交換柱層析法分離氨基酸 93
實驗43 血清白蛋白的分離與純化 95
實驗44 凝膠層析法分離純化蛋白質 97
實驗45 DEAE-Sephadex A-25分離純化多肽 100
實驗46 親和層析法分離純化單克隆抗體 102
實驗47 醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質 103
實驗48 血清糖蛋白醋酸纖維薄膜電泳 106
實驗49 牛乳中酪蛋白和乳糖的制備與鑒定 109
實驗50 聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳法分離血清蛋白質 111
實驗51 聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑒定胰島素 114
實驗52 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的相對分子質量 117
實驗53 用等電聚焦電泳法測定蛋白質等電點 120
實驗54 對流免疫電泳法測定胎兒甲種蛋白質 122
實驗55 火箭免疫電泳法 124
實驗56 Western 印跡 126
實驗57 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA） 128
第四章 核酸 131
實驗58 核酸的定量測定（定磷法） 131
實驗59 酵母RNA的提取 133
實驗60 RNA的定量測定（苔黑酚法） 135
實驗61 動物肝臟中DNA的提取 136
實驗62 DNA的定量測定（二苯胺法） 138
實驗63 5′-核苷酸的定量測定（過碘酸氧化法） 139
實驗64 DEAE-纖維素薄板層析法測定核苷酸 142
實驗65 核酸的酶法降解以及葡聚糖凝膠層析法制備5′-單核苷酸 144
實驗66 質粒DNA的提取 145
實驗67 DNA瓊脂糖凝膠電泳 147
第五章 酶 151
實驗68 影響酶促反應的因素——溫度、pH、激活劑及抑制劑 151
實驗69 胰蛋白酶米氏常數(shù)的測定 154
實驗70 膽堿酯酶米氏常數(shù)的測定 157
實驗71 過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定 159
實驗72 用正交法測定幾種因素對酶活力的影響 161
實驗73 胰蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氯對胰蛋白酶的抑制作用 164
實驗74 溶菌酶的提純結晶和活力測定 166
實驗75 豬胰糜蛋白酶的制備和純度鑒定 168
實驗76 大腸桿菌堿性磷酸酶的制備 170
實驗77 堿性磷酸酶的提取和分離及比活力測定 173
實驗78 大蒜細胞SOD的提取和分離及活力測定 177
實驗79 瓊脂糖凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶 180
實驗80 聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶 182
實驗81 肝臟谷丙轉氨酶活力測定 184
實驗82 血清谷丙轉氨酶活力測定 187
第六章 維生素 190
實驗83 維生素A的定性測定 190
實驗84 維生素B1的定性測定 191
實驗85 維生素C的定量測定（2， 6-二氯酚靛酚滴定法） 192
實驗86 維生素C的定量測定（磷鉬酸法） 195
實驗87 核黃素（維生素B2）熒光光度定量測定法 197
實驗88 胡蘿卜素的定量測定 199
實驗89 熒光法測定核黃素結合蛋白-核黃素的解離常數(shù) 201
第七章 激素 204
實驗90 甲狀腺素的測定 204
實驗91 雌二醇的測定 206
第八章 物質代謝與生物氧化 208
實驗92 肌糖原的酵解作用 208
實驗93 脂肪酸的β-氧化 210
實驗94 發(fā)酵過程中無機磷的被利用和ATP的生成（ATP的生物合成） 213
第九章 綜合實驗 215
實驗95 肝素鈉的分離提純及含量測定 215
實驗95.1 肝素鈉粗制品的制備之（Ⅰ）——鹽解法 215
實驗95.2 肝素鈉粗制品的制備之（Ⅱ）——酶解法 217
實驗95.3 肝素鈉粗制品的純化 220
實驗95.4 肝素鈉的生物測定法 222
實驗95.5 肝素鈉的定量測定 225
實驗96 用高效液相層析（HPLC）定量測定胰島素中的氨基酸 227
實驗96.1 胰島素的酸水解 227
實驗96.2 用HPLC 定量測定胰島素水解產(chǎn)物中的氨基酸 228
實驗97 維生素C 對過氧化氫（H2O2）誘導的小鼠巨噬細胞氧化損傷的保護作用 231
實驗97.1 小鼠腹腔巨噬細胞的收集與培養(yǎng) 231
實驗97.2 MTT法測定巨噬細胞死亡率 232
實驗97.3 活性氧檢測試劑盒探測細胞內(nèi)活性氧的水平 234
實驗97.4 NO和NO合成酶活性的測定 235
實驗98 酵母醇脫氫酶的提純及其性質的研究 237
實驗98.1 酵母醇脫氫酶的提純 237
實驗98.2 酵母醇脫氫酶的凝膠層析 240
實驗98.3 酵母醇脫氫酶的專一性 241
實驗98.4 酵母醇脫氫酶的動力學研究 243
實驗99 α-淀粉酶的分離純化、鑒定和Km、Vmax的測定 249
實驗99.1 α-淀粉酶的活力測定 249
實驗99.2 α-淀粉酶的疏水層析 252
實驗99.3 α-淀粉酶的離子交換柱層析 254
實驗99.4 聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑒定α-淀粉酶 255
實驗99.5 米氏常數(shù)（Km）和最大反應速率（Vmax）的測定 257
實驗100 螺旋藻藻藍蛋白的分離、純化與鑒定 260
實驗100.1 螺旋藻粗藻藍蛋白的制備 260
實驗100.2 離子交換柱層析法分離藻藍蛋白 261
實驗101 原花色素的提取、純化與測定 262
實驗101.1 山楂原花色素的提取 263
實驗101.2 原花色素的測定（Ⅰ） 264
實驗101.3 原花色素的測定（Ⅱ） 266
實驗102 熊果酸的制備和測定 267
實驗102.1 山楂熊果酸的制備 268
實驗102.2 熊果酸含量測定 268
實驗103 鎳化合物誘導人Jurkat 細胞凋亡途徑的研究 270
實驗103.1 Jurkat 細胞的培養(yǎng) 270
實驗103.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡 272
實驗103.3 RT-PCR檢測凋亡相關基因bcl-2的表達 274
實驗103.4 酶聯(lián)免疫吸附檢測Bcl-2蛋白表達水平 276
實驗104 cDNA的制備與鑒定 278
實驗104.1 從HepG2細胞中提取總RNA 278
實驗104.2 逆轉錄獲得人HepG2細胞的cDNA 280
實驗104.3 cDNA中肝癌相關基因AFP的鑒定 282
第十章 臨床生化指標的自動測定 286
附錄 287
一、生物化學實驗須知 287
二、玻璃儀器的洗滌及一些常用的洗滌劑 288
三、移液器的使用 289
四、吸管的使用 290
五、過濾和離心 291
六、930型熒光光度計的使用 292
七、UV2600紫外可見分光光度計的使用 293
八、Nano-200超微量核酸分析儀 296
九、自動生化分析儀 298
十、全自動免疫分析儀TOSOH AIA 2000標準化操作規(guī)程 298
十一、血紅蛋白檢測儀Bio-Rad D-10標準化操作規(guī)程 298
十二、實驗室常用酸堿的相對密度和濃度 298
十三、常用酸堿指示劑 298
十四、緩沖液的配制 299
十五、恒沸鹽酸的制備 305
十六、大腸桿菌丙酮粉的制備 305
十七、生物化學中某些重要化合物的Mr及pK值 305
十八、氨基酸的一些物理常數(shù) 307
十九、某些蛋白質的物理性質 308
二十、化學元素的相對原子質量表 309
二十一、離心機轉速（r/min）與相對離心力（RCF）的換算 310
二十二、硫酸銨飽和度的常用表 312
二十三、常用離子交換劑 313
二十四、常用凝膠過濾層析介質 315
主要參考文獻 317