SNX13與心力衰竭的關系及其機制研究（精）

總序
論叢前言
前言
英語縮寫一覽表
第1章 引言
1．1 概述
1．2 Sorting nexins家族與人類疾病
1．2．1 內小體
1．2．2 PX結構域
l．2．3 Sorting nexins家族
1．2．4 Sorting nexins家族與人類疾病
1．2．5 本章小結
第2章 SNX13與心力衰竭的關系
2．1 材料和儀器
2．1．1 臨床病例標本
2．1．2 實驗動物
2．1．3 主要試劑
2．1．4 主要儀器
2．1．5 PCR引物序列
2．2 實驗方法
2．2．1 組織RNA提取
2．2．2 RNA逆轉錄
2．2．3 定量PCR
2．2．4 小鼠心衰模型的建立
2．2．5 小動物心臟超聲
2．2．6 Western Blot免疫印跡
2．2．7 統(tǒng)計學分析
2．3 結果
2．3．1 人心力衰竭心肌組織中SNX13的mRNA水平顯著下調
2．3．2 人心力衰竭心肌組織中SNX13的蛋白水平顯著下調
2．3．3 TAC小鼠心肌組織中SNX13的表達水平顯著下調
2．4 討論
第3章 SNX13敲除引起心力衰竭的病理生理機制
3．1 材料和儀器
3．1．1 實驗動物
3．1．2 主要試劑
3．1．3 主要儀器
3．2 實驗方法
3．2．1 信息學預測
3．2．2 分離成年斑馬魚各器官組織
3．2．3 斑馬魚胚胎整體原位雜交
3．2．4 斑馬魚Morpholino顯微注射
3．2．5 斑馬魚胚胎western blot
3．2．6 斑馬魚胚胎mRNA分析
3．2．7 斑馬魚胚胎HE染色
3．2．8 共聚焦顯微鏡記錄心功能
3．2．9 電子顯微鏡成像
3．2．10 吖啶橙染色
3．2．11 Caspase 3免疫組化熒光染色
3．2．12 新生大鼠心肌細胞分離與轉染
3．2．13 心肌細胞RNA分析
3．2．14 心肌細胞western blot
3．2．15 DNA ladder實驗
3．2．16 病毒載體構建與感染
3．2．17 流式細胞儀檢測凋亡
3．2．18 線粒體組分分離
3．2．19 統(tǒng)計學分析
3．3 結果
3．3．1 斑馬魚SNX13敲除后出現(xiàn)心臟功能異常
3．3．2 斑馬魚SNX13敲除后的心肌組織出現(xiàn)自噬現(xiàn)象和凋亡
3．3．3 SNX13敲除的新生大鼠心肌細胞發(fā)生凋亡
3．3．4 SNX13敲除后誘發(fā)外源性凋亡途徑
3．4 討論
3．4．1 SNX13敲除模式動物的建立
3．4．2 SNX13敲除的斑馬魚發(fā)生了心衰
3．4．3 SNX13敲除致心肌細胞凋亡
3．4．4 SNX13敲除誘發(fā)細胞外源性凋亡途徑
第4章 SNX13介導心肌細胞凋亡的機制
4．1 材料和儀器
4．1．1 實驗動物
4．1．2 主要試劑
4．1．3 主要儀器
4．2 實驗方法
4．2．1 組織／細胞Western blot
4．2．2 新生大鼠心肌細胞分離與轉染
4．2．3 心肌細胞RNA分析
4．2．4 蛋白酶活性檢測
4．2．5 病毒載體構建與轉染
4．2．6 流式細胞儀凋亡檢測
4．2．7 mRNA體外轉錄
4．2．8 顯微注射
4．2．9 免疫共沉淀（CO-IP）
4．2．10 細胞免疫熒光染色
4．2．11 早期內小體組分分離
4．2．12 H9C2細胞培養(yǎng)
4．2．13 缺失突變體構建
4．2．14 細胞cAMP檢測
4．2．15 熒光能量共振轉移（FRET）
4．2．16 統(tǒng)計學分析
4．3 結果
4．3．1 SNX13敲除會下調心肌特異性抗凋亡分子ARC蛋白的表達
4．3．2 SNX13敲除加速了ARC蛋白的溶酶體降解途徑
4．3．3 SNX13缺失引起的凋亡和心力衰竭緣于ARC蛋白水平的下調
4．3．4 SNX13通過內小體系統(tǒng)調控ARC的胞內轉運
4．3．5 SNX13通過PXA結構域介導ARC的胞內轉運
4．4 討論
4．4．1 SNX13敲除致ARC表達下調
4．4．2 SNX13敲除后ARC的溶酶體途徑降解
4．4．3 SNX13敲除后凋亡和心力衰竭的機制是ARC的下調
4．4．4 SNX13調控ARC的轉位
4．4．5 SNX13通過PXA結構域與ARC作用
第5章 結論與展望
5．1 結論
5．2 進一步工作
參考文獻
后記