橘小實(shí)蠅嗅覺通訊的分子機(jī)制研究

第1章　緒論  001
1.1  橘小實(shí)蠅生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性  002
1.1.1　橘小實(shí)蠅形態(tài)特征與生活習(xí)性  002
1.1.2　橘小實(shí)蠅生活史  004
1.1.3　橘小實(shí)蠅為害特點(diǎn)  005
1.1.4　橘小實(shí)蠅適生環(huán)境與種群動(dòng)態(tài)  007
1.1.5　橘小實(shí)蠅入侵風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及適生性分析  007
1.1.6　橘小實(shí)蠅綜合控制策略  009
1.1.7　橘小實(shí)蠅化學(xué)生態(tài)學(xué)研究概述  017
1.2  應(yīng)用甲基丁香酚防控橘小實(shí)蠅的研究進(jìn)展  028
1.2.1　甲基丁香酚引誘橘小實(shí)蠅雄成蟲的生理學(xué)基礎(chǔ)  029
1.2.2　甲基丁香酚誘捕橘小實(shí)蠅影響因素及田間應(yīng)用  030
1.2.3　甲基丁香酚衍生化合物  031
1.2.4　需解決的科學(xué)問(wèn)題  032
1.3  研究目的和研究思路  033
1.3.1　研究目的  033
1.3.2　研究思路  033
1.4  研究技術(shù)路線  034
參考文獻(xiàn)  035

第2章　氣味結(jié)合蛋白在橘小實(shí)蠅雄成蟲識(shí)別甲基丁香酚過(guò)程中分子功能的研究  052
2.1  引言  053
2.2  材料與方法  054
2.2.1　供試?yán)ハx  054
2.2.2　供試試劑與耗材  054
2.2.3　主要儀器  055
2.2.4　溶液的配置  056
2.2.5　試驗(yàn)方法  057
2.3  結(jié)果與分析  072
2.3.1　人工汰選后對(duì)甲基丁香酚無(wú)趨性雄成蟲比例的變化  072
2.3.2　對(duì)甲基丁香酚有趨性和無(wú)趨性雄成蟲觸角iTRAQ蛋白組鑒定與結(jié)果分析  073
2.3.3　觸角差異蛋白GO功能注釋與分析  078
2.3.4　觸角差異蛋白KEGG通路分析  079
2.3.5　qRT-PCR檢測(cè)差異蛋白編碼基因在有、無(wú)趨性雄成蟲觸角的表達(dá)量  080
2.3.6　氣味結(jié)合蛋白進(jìn)化樹分析  081
2.3.7　性別與日齡對(duì)橘小實(shí)蠅成蟲對(duì)甲基丁香酚趨性及OBPs表達(dá)量的影響  082
2.3.8　甲基丁香酚顯著誘導(dǎo)雄成蟲觸角OBP2表達(dá)量上調(diào)  083
2.3.9　OBP2、OBP50c、OB56D-1、OB56D-2生物學(xué)功能的研究  085
2.4  氣味結(jié)合蛋白OBP2調(diào)控橘小實(shí)蠅雄成蟲趨向ME  089
參考文獻(xiàn)  091

第3章　氣味受體在調(diào)控橘小實(shí)蠅雄成蟲對(duì)甲基丁香酚趨性行為的分子功能研究  095
3.1  引言  096
3.2  試驗(yàn)方法  097
3.2.1　供試?yán)ハx  097
3.2.2　供試試劑  097
3.2.3　主要儀器  098
3.2.4　溶液的配置  098
3.2.5　橘小實(shí)蠅雄成蟲處理與觸角樣品收集  099
3.2.6　觸角總RNA提取、cDNA文庫(kù)構(gòu)建及Illumina測(cè)序  099
3.2.7　序列De Novo組裝和Unigenes功能注釋  100
3.2.8　差異表達(dá)基因的篩選與分析  101
3.2.9　差異表達(dá)基因GO功能注釋、GO富集與KEGG富集分析  102
3.2.10　熒光定量PCR（qRT-PCR）驗(yàn)證基因表達(dá)量  103
3.2.11　OR63a-1和OR88a基因序列分析與系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建  104
3.2.12　不同日齡和日節(jié)律對(duì)橘小實(shí)蠅雄成蟲對(duì)ME的趨性及OR63a-1、OR88a表達(dá)量的影響  104
3.2.13　OR63a-1和OR88a在爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)和雙電極電壓鉗記錄  104
3.2.14　RNA干擾驗(yàn)證OR63a-1和OR88a的生物學(xué)功能  106
3.2.15　數(shù)據(jù)分析  106
3.3  試驗(yàn)結(jié)果  107
3.3.1　RNA-Seq數(shù)據(jù)質(zhì)控與評(píng)估  107
3.3.2　不同處理組樣本轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與De novo組裝分析  109
3.3.3　轉(zhuǎn)錄組Unigenes基本功能注釋  112
3.3.4　ME處理組與MO對(duì)照組橘小實(shí)蠅雄成蟲觸角差異表達(dá)基因分析  115
3.3.5　差異表達(dá)基因的GO分類、GO富集與KEGG通路富集分析  115
3.3.6　與嗅覺傳導(dǎo)相關(guān)的差異表達(dá)基因鑒定  117
3.3.7　qRT-PCR檢測(cè)差異基因的表達(dá)量  118
3.3.8　氣味受體進(jìn)化樹分析  121
3.3.9　日齡和日節(jié)律對(duì)橘小實(shí)蠅雄成蟲趨向ME能力及OR63a-1、OR88a表達(dá)量的影響  122
3.3.10　爪蟾卵母細(xì)胞系統(tǒng)研究OR63a-1、OR88a分子功能  123
3.3.11　OR88a調(diào)控橘小實(shí)蠅雄成蟲對(duì)ME的趨性行為  124
3.3.12　橘小實(shí)蠅雄成蟲識(shí)別、轉(zhuǎn)導(dǎo)ME的分子模型  126
3.4  OR88a調(diào)控橘小實(shí)蠅雄成蟲對(duì)ME的趨性行為  127
參考文獻(xiàn)  128

第4章　結(jié)論與討論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望  132
4.1  結(jié)論  133
4.2  討論  134
4.2.1　OBP2參與橘小實(shí)蠅雄成蟲識(shí)別ME的分子過(guò)程  134
4.2.2　OR88a調(diào)控橘小實(shí)蠅性成熟雄成蟲對(duì)ME的趨性行為  136
4.2.3　橘小實(shí)蠅性成熟雄成蟲識(shí)別ME的分子模型  139
4.3  創(chuàng)新點(diǎn)  140
4.4  展望  140
參考文獻(xiàn)  141

附錄　嗅覺蛋白質(zhì)二級(jí)質(zhì)譜圖譜  146